EpiNext CUT&LUNCH檢測試劑盒是一套完整的優(yōu)化試劑，專為以下目的而設(shè)計：

1、快速富集蛋白質(zhì)（組蛋白或強結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子）特異性DNA復合物

2、通過qPCR或下一代直接從細胞中提取蛋白質(zhì)和DNA之間的相互作用

3、使用Illumina平臺進行測序。

艾美捷EpiNext CUT&LUNCH檢測試劑盒（P-2035-24）使用前需知事項：

起始材料：起始材料可以包括各種哺乳動物細胞樣本，如培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的培養(yǎng)細胞、原代細胞、從血液、體液中分離出的稀有細胞群體、新鮮/冷凍組織以及從整個細胞群體和胚胎細胞中分選出來的特定細胞等。

細胞輸入量：每個反應(yīng)的細胞量可以是2 x 10^3到5 x 10^5個細胞。為了最佳制備，細胞輸入量應(yīng)該是2 x 10^5，盡管對于修飾組蛋白，即使只有500個細胞也可獲得結(jié)果。

抗體：抗體應(yīng)為ChIP級別，以便識別與DNA或其他蛋白結(jié)合的蛋白。如果您使用的抗體尚未針對ChIP進行驗證，則應(yīng)使用適當?shù)膶φ湛贵w，如抗RNA聚合酶II、抗H3K4me3或抗H3K9me3，以證明這些抗體適用于ChIP。

內(nèi)部對照：此試劑盒提供了CUT&LUNCH使用的陰性和陽性對照。

注意事項：為避免交叉污染，仔細地將樣品或溶液滴入管中或瓶中。使用防氣溶膠的移液管頭，并在液體轉(zhuǎn)移之間始終更換移液管頭。在整個操作過程中佩戴手套。如果手套與樣品接觸，立即更換手套。

運輸與儲存：

該試劑盒分兩部分運輸：第一部分在常溫下運輸，第二部分在4°C的冷凍冰袋中運輸。

收到后，請根據(jù)上表的溫度要求，在避光條件下儲存各組分。

注意：使用前請檢查洗滌緩沖液（WB）和滲透緩沖液（PB）是否含有鹽分沉淀。如果有，請在室溫或37°C下短暫加熱并搖動，直到鹽分重新溶解。

如果儲存得當，試劑盒的所有組分自發(fā)貨日期起穩(wěn)定6個月。

CUT&LUNCH檢測具有以下優(yōu)點和特點：

? 極快的3步協(xié)議：從完整的細胞開始，無需ConA固定。整個過程可以在1小時50分鐘內(nèi)完成，最小化核損傷和染色質(zhì)損失，同時保持天然染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。

? 提高特異性和最小化背景：獨特的核酸切割酶通過選擇性地在目標蛋白/DNA復合物的兩端切割DNA，確保低序列偏差，不影響與蛋白結(jié)合的DNA。非特異性蛋白-DNA復合物被選擇性地消除，實現(xiàn)目標蛋白富集區(qū)域的高分辨率映射。

? 低輸入材料：在最短時間內(nèi)完成強大的未結(jié)合DNA切割和免疫捕獲。這種方法使用細胞和組織，同時提供目標蛋白的最大降解保護和最小樣本損失。因此，輸入的細胞量可以少至500個細胞。

? 廣泛適用性：適用于各種物種的培養(yǎng)細胞以及新鮮或冷凍組織，與組蛋白和轉(zhuǎn)錄因子兼容，同時保持檢測的特異性和靈敏度。

? 高度便捷：試劑盒包括所有必要的組分，使EpiNext? CUT&LUNCH試劑盒既方便又經(jīng)濟。

? 與現(xiàn)有流程無縫集成：富集的DNA用于NGS，可以使用現(xiàn)有的、經(jīng)過時間考驗的ChIP-seq生物信息學軟件和工具進行分析。

圖：使用EpiNext 富集靶蛋白/DNACUT&LUNCH檢測試劑盒：捕獲組蛋白/DNA復合物通過陽性對照抗體（H3K4me3）從200000

MCF-7細胞。非免疫性IgG用作陰性控制。富集的DNA被純化并發(fā)出熒光通過Qubit定量或通過qPCR分析，靶向GAPDH啟動子用于富集倍數(shù)比較。

EpiNext CUT&LUNCH 檢測試劑盒pk傳統(tǒng) CUT&RUN/芯片

CUT&LUNCH

工作流程方便程度：方便；總共只需 19 個步驟

所需細胞數(shù)量：2,000 - 500,000

分析目標范圍：適用于組蛋白、適用于TF蛋白

裂解和收集的 DNA 的特異性：穩(wěn)定;不依賴于樣品中所含目標分子的數(shù)量；不受目標類型和數(shù)量的影響

序列分辨率：高

負/陽性對照率 （%）：5%

檢測時間長度：1 小時 50 分鐘

每次檢測反應(yīng)的價格：低

傳統(tǒng) CUT&RUN

方便：不太方便>總共 50 步

所需細胞數(shù)量：5,000 - 500,000

分析目標范圍：適用于組蛋白、不適用于TF蛋白

裂解和收集的 DNA 的特異性：穩(wěn)定;根據(jù)樣品中所含目標分子的數(shù)量而變化、受目標類型和數(shù)量影響

序列分辨率：高

負/陽性對照率 （%）：30%

檢測時間長度：6 小時 - 2 天

每次檢測反應(yīng)的價格：高

芯片

方便：因不同的 ChIP 檢測而異

所需細胞數(shù)量：100 - 10,000,000

分析目標范圍：適用于組蛋白、適用于TF蛋白

裂解和收集的 DNA 的特異性：不適用

序列分辨率：中等

負/陽性對照率 （%）：20%

檢測時間長度：對于不同的 ChIP 檢測，從 4 小時 - 2 天不等

每次檢測反應(yīng)的價格：不同