Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一種新興的DNA-蛋白質(zhì)互作研究方法。CUT&Tag以融合了protein A/G的Tn5轉(zhuǎn)座酶為核心，融合蛋白通過protein A/G與抗體結(jié)合，使得Tn5被栓系在靶位點周圍，從而在目的位點附近進(jìn)行酶切反應(yīng)，并同時引入二代測序所必需的接頭序列，產(chǎn)物DNA經(jīng)過后續(xù)提取與PCR擴(kuò)增后，得到直接用于測序的文庫。CUT&Tag與傳統(tǒng)的ChIP-Seq技術(shù)相比較，實驗不需要超聲打斷，也不需要傳統(tǒng)的連接法添加測序接頭，操作簡單、周期短、信噪比高、重復(fù)性好、細(xì)胞用量少，為極低起始細(xì)胞量和單細(xì)胞測序研究提供了可能性。

自2019年CUT&Tag技術(shù)誕生以來，經(jīng)過大量的實踐，發(fā)現(xiàn)該技術(shù)在組蛋白修飾及部分轉(zhuǎn)錄因子與DNA互作研究中可以獲得高信噪比的結(jié)果，但是針對一些與DNA結(jié)合力較弱或者結(jié)合具有高度動態(tài)性的DNA結(jié)合蛋白，較難得到理想的實驗結(jié)果。

艾美捷CUT&Tag試劑盒特點：

1、高濃縮： 使用獨特的核酸切割酶混合物，其具有低序列偏倚，以同時片段化染色質(zhì)并切割/去除靶蛋白/DNA復(fù)合物兩端的任何DNA序列，而不影響靶蛋白占據(jù)的DNA。因此，可以可靠地鑒定真正的靶蛋白富集區(qū)域，并且可以實現(xiàn)高分辨率定位。

2、低投入材料： 穩(wěn)健的無超聲片段化、未結(jié)合DNA切割和免疫捕獲均在同一單管中進(jìn)行，并采用珠上連接。該方法允許在細(xì)胞和組織中使用，并允許以Z小的樣品損失對靶蛋白進(jìn)行Z大的降解保護(hù)。結(jié)果，輸入細(xì)胞量可以少至500個細(xì)胞或染色質(zhì)量可以低至50 ng。

3、原位標(biāo)記： 在DNA純化之前，DNA銜接子與染色質(zhì)的珠上連接（原位）導(dǎo)致DNA片段大小增加，允許純化與轉(zhuǎn)錄因子（TF）結(jié)合的非常短的片段（例如：< 70 bp）用于文庫構(gòu)建。

4、Z低背景： 在靶蛋白/DNA復(fù)合物的兩（2）端原位切割未結(jié)合的DNA序列能夠使免疫捕獲/測序背景Z小化，從而允許使用<1000萬個讀數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

5、快速、簡化的程序： 從細(xì)胞到文庫DNA的過程不到5小時。

6、非常方便：該試劑盒包含CUT&Tag原位測序每個步驟所需的所有組件，足以用于蛋白質(zhì)/DNA捕獲和捕獲的DNA文庫制備，從而使cTIP（CUT&Tag In-Place）測序試劑盒Z方便，結(jié)果可靠且一致。

CUT&Tag試劑盒反應(yīng)圖示：

DNA-Target Protein-Antibody-ChipTag結(jié)合示意圖