一、產(chǎn)品概述

SPY650-FastAct 是一種熒光發(fā)生型遠(yuǎn)紅探針，專用于活細(xì)胞中快速肌動(dòng)蛋白動(dòng)態(tài)過程的可視化。該探針由 SPY 染料與化學(xué)修飾的天然產(chǎn)物茉莉內(nèi)酯（jasplakinolide）偶聯(lián)而成。茉莉內(nèi)酯是已知的肌動(dòng)蛋白結(jié)合化合物，經(jīng)化學(xué)優(yōu)化后，該探針能夠以高特異性和低背景對(duì)活細(xì)胞中的 F-肌動(dòng)蛋白進(jìn)行標(biāo)記，同時(shí)支持快速動(dòng)態(tài)過程的實(shí)時(shí)成像。

二、核心應(yīng)用場(chǎng)景

活細(xì)胞中快速肌動(dòng)蛋白動(dòng)態(tài)的可視化：適用于觀察肌動(dòng)蛋白絲的快速組裝、解聚及重塑過程。

穩(wěn)定肌動(dòng)蛋白絲的可視化：也可用于標(biāo)記相對(duì)穩(wěn)定的肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)。

多色成像兼容：其遠(yuǎn)紅發(fā)射光譜為與其他顏色熒光標(biāo)記（如綠色、黃色）聯(lián)合使用提供了便利，便于開展多參數(shù)細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)。

三、材料構(gòu)成與工作原理

由艾美捷代理，Cytoskeleton推出的SPY650-FastAct 探針（貨號(hào)：CY-SC505）由兩部分功能單元組成：

SPY 染料：提供熒光信號(hào)，且具有熒光發(fā)生特性——僅在結(jié)合 F-肌動(dòng)蛋白時(shí)熒光顯著增強(qiáng)，未結(jié)合狀態(tài)下熒光極弱，從而有效降低背景。

化學(xué)修飾的茉莉內(nèi)酯：作為肌動(dòng)蛋白結(jié)合元件，賦予探針對(duì) F-肌動(dòng)蛋白的高親和力和特異性。

這種設(shè)計(jì)使得探針能夠快速結(jié)合至肌動(dòng)蛋白絲，并以高時(shí)空分辨率捕捉肌動(dòng)蛋白的動(dòng)態(tài)行為。

四、關(guān)鍵特性

特性 | 描述

激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng) | Ex: 652 nm, Em: 674 nm（遠(yuǎn)紅光譜區(qū)）

細(xì)胞通透性 | 可穿透活細(xì)胞膜，無需透化處理

適用樣本 | 活細(xì)胞（不適用于固定細(xì)胞）

熒光發(fā)生特性 | 結(jié)合 F-肌動(dòng)蛋白后熒光增強(qiáng)，背景極低

成像兼容性 | 支持寬場(chǎng)、共聚焦、SIM（結(jié)構(gòu)光照明顯微鏡）、STED（受激發(fā)射損耗顯微鏡）

生物活性驗(yàn)證 | 在活 HeLa 細(xì)胞中驗(yàn)證了標(biāo)記肌動(dòng)蛋白絲及快速動(dòng)態(tài)的能力

五、生物活性測(cè)定方法

CY-SC505 探針的生物活性通過其在活 HeLa 細(xì)胞培養(yǎng)物中有效標(biāo)記肌動(dòng)蛋白絲和捕捉快速肌動(dòng)蛋白動(dòng)態(tài)的能力進(jìn)行評(píng)估。具體操作建議如下：

1. 快速動(dòng)態(tài)成像：不建議進(jìn)行洗滌步驟。洗滌會(huì)移除未結(jié)合的探針，但可能干擾對(duì)快速動(dòng)態(tài)過程的連續(xù)記錄。為捕捉肌動(dòng)蛋白的瞬時(shí)變化，應(yīng)保持探針存在于成像培養(yǎng)基中。

2. 長(zhǎng)時(shí)間延時(shí)成像：若需要進(jìn)行數(shù)小時(shí)以上的時(shí)間序列采集，同樣建議不進(jìn)行洗滌，將探針持續(xù)保留在成像培養(yǎng)基中，以維持穩(wěn)定的標(biāo)記信號(hào)和動(dòng)態(tài)過程的完整記錄。

六、使用注意事項(xiàng)

該探針專門設(shè)計(jì)用于活細(xì)胞，不推薦用于固定樣本。

由于探針的熒光發(fā)生特性，無需額外洗滌即可獲得高信噪比圖像，尤其適合追蹤肌動(dòng)蛋白的快速重構(gòu)事件（如細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、分裂、吞噬等）。

遠(yuǎn)紅光譜（652/674 nm）可減少對(duì)細(xì)胞的光毒性，并降低自發(fā)熒光干擾，適用于長(zhǎng)時(shí)間成像實(shí)驗(yàn)。