蛋白質(zhì)羰基是蛋白質(zhì)氧化修飾過(guò)程中多種氨基酸的早期標(biāo)志，其含量反映了蛋白質(zhì)氧化損傷程度，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。原理是羰基基團(tuán)與2,4-二硝基苯肼反應(yīng)，生成具有在370 nm處特征吸收峰的紅色2,4-二硝基苯肼酮。

艾美捷蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒基本信息：

貨號(hào)：D-AKC1200-96T

規(guī)格：: 48T / 96T

儲(chǔ)存：在4°C下儲(chǔ)存12個(gè)月，避光

提供的材料和儲(chǔ)存條件：

所需材料但未提供的：

· 可測(cè)量370 nm處吸光度的微孔板閱讀器或可見(jiàn)光分光光度計(jì)

· 孵化器、制冰機(jī)、冷藏離心機(jī)

· 96孔板或微玻璃比色皿、精密移液器、一次性移液頭

· 去離子水、乙醇、乙酸乙酯

· Dounce勻漿器（用于組織樣本）

試劑制備：

提取緩沖液：按照提供的使用說(shuō)明使用即可。使用前應(yīng)將其平衡至室溫。存放于4°C。工作抗氧化劑：根據(jù)樣本數(shù)量制備，取0.1克并用1毫升去離子水溶解，1毫升可用于10個(gè)樣本。存放于4°C，避光。顯色劑：按照提供的使用說(shuō)明使用即可。使用前應(yīng)將其平衡至室溫。存放于4°C，避光。HCl：按照提供的使用說(shuō)明使用即可。使用前應(yīng)將其平衡至室溫。存放于4°C。TCA：按照提供的使用說(shuō)明使用即可。使用前應(yīng)將其平衡至室溫。存放于4°C。鹽酸胍：按照提供的使用說(shuō)明使用即可。使用前應(yīng)將其平衡至室溫。存放于4°C。

樣品制備：

1. 動(dòng)植物組織樣品：稱取0.1克組織，加入1毫升提取緩沖液，在冰上均質(zhì)。以4,000 g離心10分鐘于4°C。取上清液，加入0.1毫升工作抗氧化劑，室溫下靜置10分鐘，以10,000 g離心10分鐘于4°C。使用上清液進(jìn)行測(cè)定，并將其放置在冰上待測(cè)。

2. 細(xì)胞或細(xì)菌：將5×10^6個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌收集到離心管中，用冷PBS洗滌細(xì)胞或細(xì)菌，離心后廢棄上清液；加入1毫升提取緩沖液超聲破碎細(xì)胞或細(xì)菌5分鐘（功率20%或200瓦特，超聲3秒，間隔7秒，重復(fù)30次）。以10,000 g離心10分鐘于4°C。使用上清液進(jìn)行測(cè)定，并將其放置在冰上待測(cè)。

3. 血清（血漿）樣本：直接進(jìn)行測(cè)試。

數(shù)據(jù)分析

注意：我們?yōu)槟峁┝擞?jì)算公式，包括推導(dǎo)過(guò)程和最終公式。兩者完全相等。建議使用粗體的簡(jiǎn)潔計(jì)算公式作為最終公式。

A. 96孔板計(jì)算公式

1. 根據(jù)蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mg蛋白）= [ΔA×V總÷(ε×d)]÷(V樣品×Cpr) = 0.454×ΔA÷Cpr

2. 根據(jù)樣品重量計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g鮮重）= [ΔA×V總÷(ε×d)]÷(W×V樣品÷V總樣品) = 0.454×ΔA÷W

3. 根據(jù)細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/10^4）= [ΔA×V總÷(ε×d)]÷(500×V樣品÷V總樣品) = 0.454×ΔA÷500

4. 根據(jù)液體體積計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）= [ΔA×V總÷(ε×d)]÷V樣品 = 0.454×ΔA

其中：ΔA = A測(cè)試 - A對(duì)照；V總：總反應(yīng)體積，0.3 mL；ε：羰基摩爾消光系數(shù)，22 L/mmol/cm；d：96孔板直徑，0.5 cm；V樣品：添加的樣品體積，0.06 mL；V總樣品：添加的提取緩沖液體積，1 mL；Cpr：樣品蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品重量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌的總數(shù)，5×10^6。

B. 微玻璃比色皿計(jì)算公式

上述計(jì)算公式中的光學(xué)直徑 d：可以調(diào)整為 d：1 cm 進(jìn)行計(jì)算。

注意：如果基于樣品蛋白質(zhì)濃度的計(jì)算方法，建議使用 EZMeta? 蛋白質(zhì)羰基比色測(cè)定試劑盒。

僅供研究使用，不用于人類或臨床診斷