無機(jī)磷主要指無機(jī)磷酸鹽基團(tuán)，它參與生物體的各種代謝過程，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化，并且還可以促進(jìn)碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和運(yùn)輸。銨鉬酸鹽與無機(jī)磷酸鹽反應(yīng)形成一種在660 nm處具有特征吸收峰的物質(zhì)。通過測量在660 nm處的吸光度，可以計(jì)算出無機(jī)磷的含量。

艾美捷組織無機(jī)磷含量檢測試劑盒：

貨號：D-AKC2170

規(guī)格：96孔板

儲存條件：儲存在4°C下，避光，保存12個月

適用樣品：動物和植物組織

提供的材料和儲存條件：

試劑制備：

試劑I：直接使用，使用前使其恢復(fù)至室溫。儲存在4°C。

試劑II：直接使用，使用前使其恢復(fù)至室溫。儲存在4°C。

試劑III：使用前需準(zhǔn)備，加入2 mL去離子水并充分溶解。儲存在4°C，避光。

試劑IV：使用前需準(zhǔn)備，加入8 mL去離子水并充分溶解。儲存在4°C，避光。

磷固定液：按照去離子水：試劑II：試劑III：試劑IV=10：5：2：8的比例準(zhǔn)備（請根據(jù)實(shí)際需要準(zhǔn)備），并在同一天使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：直接使用，使用前使其恢復(fù)至室溫。儲存在4°C。

樣品制備：

1、組織樣品：稱取0.1克組織，加入1 mL試劑I并在冰上均質(zhì)化（組織質(zhì)量（克）：試劑I體積（mL）為1:10）。在4°C下以10,000 g離心10分鐘。使用上清液進(jìn)行分析，并將其放在冰上進(jìn)行測試。

程序分析：

1. 預(yù)熱微孔板讀取器或可見光分光光度計(jì)超過30分鐘，并將波長調(diào)整為660 nm，可見光分光光度計(jì)使用去離子水歸零。

2. 操作臺（在1.5 mL離心管中進(jìn)行）：

3. 混合后，將其放入40°C的水浴中加熱10分鐘，室溫冷卻10分鐘，取200 μL上清液加入可見光分光光度計(jì)或96孔板中，然后在660 nm處測量吸光度。空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和測試孔的吸光度分別記錄為ABlank、AStandard和ATest。最后，計(jì)算ΔATest=ATest-ABlank，ΔAStandard=AStandard-ABlank。

注意：空白孔和標(biāo)準(zhǔn)孔只需測量1次。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要進(jìn)行2-3個樣品的預(yù)實(shí)驗(yàn)。適當(dāng)增加樣品數(shù)量。如果ΔATest大于1.0，可以使用試劑I適當(dāng)稀釋樣品，將計(jì)算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，或適當(dāng)減少樣品數(shù)量。

數(shù)據(jù)分析：

注意：計(jì)算公式，包括推導(dǎo)過程和最終公式。兩者完全相等。建議使用加粗的簡潔計(jì)算公式作為最終公式。

（1）按蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

無機(jī)磷含量（μmol/mg蛋白）=（C標(biāo)準(zhǔn)×ΔATest÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V總 ÷ Cpr = 1×ΔATest÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

（2）按樣品新鮮重量計(jì)算

無機(jī)磷含量（μmol/g新鮮重量）=（C標(biāo)準(zhǔn)×ΔATest÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V總÷W = 1×ΔATest÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)：1 mmol/L；V總：上清液總體積，1 mL = 0.001 L；W：樣品重量，克

該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。