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脂肪酸合酶(FAS)是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶,催化乙酰輔酶A和馬來酰輔酶A生成長鏈脂肪酸。FAS廣泛表達(dá)于各種組織和細(xì)胞中,在哺乳動物的肝臟、腎臟、腦、肺、乳腺和脂肪組織中豐富存在。EZMeta?脂肪酸合酶(FAS)比色活性檢測試劑盒提供了一種方便的工具,用于檢測FAS活性。其原理是FAS催化乙酰輔酶A、馬來酰輔酶A和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+。NADPH在340 nm處具有特征性吸收峰,而NADP+則沒有。通過檢測340 nm處吸光度的下降速率來計(jì)算FAS的酶活性。
艾美捷 脂肪酸合成酶 (FAS) 活性檢測試劑盒:
編號:D-AKC2240
規(guī)格:48T / 96T
儲存:在-20°C下儲存6個月
適用樣品:血清、血漿、動物和植物組織、細(xì)胞、細(xì)菌
脂肪酸合成酶 (FAS) 活性檢測試劑盒提供的材料和儲存條件:

脂肪酸合成酶 (FAS) 活性檢測試劑盒所需材料(但不包括在內(nèi)):
· 可測量340 nm處吸光度的微孔板讀取器或紫外可見分光光度計(jì)
· 96孔UV板或微石英比色皿、精密移液器、一次性移液頭
· 冰制造機(jī)、冷藏離心機(jī)、培養(yǎng)箱
· 去離子水
· 均質(zhì)器(用于組織樣本)
脂肪酸合成酶 (FAS) 活性檢測試劑盒試劑準(zhǔn)備:
提取緩沖液:按照提供的狀態(tài)直接使用。在使用前一天取出,放在4°C解凍并徹底混合。使其與室溫平衡。儲存在-20°C。測定緩沖液:按照提供的狀態(tài)直接使用。在使用前使其與室溫平衡。儲存在4°C。NADPH:為96孔加入1.64 mL測定緩沖液,為48孔加入0.82 mL測定緩沖液,溶解后使用。此溶液可以分裝后儲存在-20°C,以避免反復(fù)凍結(jié)和解凍。乙酰輔酶A:為96孔加入0.44 mL測定緩沖液,為48孔加入0.22 mL測定緩沖液,溶解后使用。此溶液可以分裝后儲存在-20°C,以避免反復(fù)凍結(jié)和解凍。馬來酰輔酶A:為96孔加入0.84 mL測定緩沖液,為48孔加入0.42 mL測定緩沖液,溶解后使用。此溶液可以分裝后儲存在-20°C,以避免反復(fù)凍結(jié)和解凍。工作試劑:為一個孔準(zhǔn)備180 ?L工作試劑,加入16 ?L溶解的NADPH,4 ?L溶解的乙酰輔酶A,8 ?L溶解的馬來酰輔酶A和152 ?L測定緩沖液。使用前制備工作試劑,根據(jù)需要量進(jìn)行調(diào)配。
脂肪酸合成酶 (FAS) 活性檢測試劑盒樣品制備:
注意:推薦使用新鮮樣品,如果不立即檢測,樣品可以在-80°C下儲存一個月。
1. 動物組織:稱取0.1 g組織,加入1 mL提取緩沖液,在冰上均質(zhì)。在4°C下以12,000 g離心40分鐘。使用上清液進(jìn)行檢測,并將其放在冰上進(jìn)行測試。
2. 植物組織:稱取0.1 g組織,加入1 mL提取緩沖液并研磨。在冰浴中超聲波處理5分鐘(功率20%或200 W,超聲波3秒,間隔7秒,重復(fù)30次)。在4°C下以12,000 g離心40分鐘。使用上清液進(jìn)行檢測,并將其放在冰上進(jìn)行測試。
3. 細(xì)胞或細(xì)菌:收集5×10^6個細(xì)胞或細(xì)菌到離心管中,用冷PBS洗滌細(xì)胞或細(xì)菌,離心后棄去上清液;加入1 mL提取緩沖液,在冰浴中超聲波處理5分鐘(功率20%或200 W,超聲波3秒,間隔7秒,重復(fù)30次)。在4°C下以12,000 g離心40分鐘。使用上清液進(jìn)行檢測,并將其放在冰上進(jìn)行測試。
4. 血清、血漿或其他液體樣品:直接進(jìn)行檢測。
注意:對于脂肪含量較高的動物組織,在離心后去除上層脂肪,然后取上清液。如果通過蛋白濃度計(jì)算含量,最好使用EZMeta?脂肪酸合酶(FAS)比色活性檢測試劑盒來量化總蛋白質(zhì)。
該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途
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