DNA存儲著生物體賴以生存和繁衍的遺傳信息，因此維護(hù)DNA分子的完整性對細(xì)胞至關(guān)緊要。然而，在生命活動中，DNA時刻遭受著內(nèi)源性（氧化自由基、復(fù)制叉崩塌等）或外源性（電離輻射、烷化劑等）刺激，DNA損傷不可避免。

 DNA損傷是復(fù)制過程中發(fā)生的DNA核苷酸序列永久性改變，并導(dǎo)致遺傳特征改變的現(xiàn)象。當(dāng)各種內(nèi)外源DNA損傷因子誘發(fā)細(xì)胞DNA鏈斷裂時，DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，在細(xì)胞裂解液作用下，細(xì)胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其它成分均擴(kuò)散到細(xì)胞裂解液中。DNA損傷后將會導(dǎo)致遺傳特征改變，基因功能喪失等現(xiàn)象。在疾病機(jī)制研究中，針對DNA損傷的檢測也是必不可少的。但都有什么方法可檢測細(xì)胞DNA損傷呢？

檢測DNA損傷的方法有很多，根據(jù)其原理大致可以分為3類：基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測DNA損傷、基于分子雜交檢測DNA損傷以及基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷。前兩種方法是基于熒光標(biāo)記直接觀測DNA的損傷情況，而基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷是通過標(biāo)記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。

一、彗星實(shí)驗(yàn)—基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測DNA損傷

彗星實(shí)驗(yàn)（Comet assay）也被稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一種在單細(xì)胞水平上檢測DNA損傷的技術(shù)。當(dāng)各種內(nèi)源性和外源性 DNA 損傷因子誘發(fā)細(xì)胞 DNA 鏈斷裂時，其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，在細(xì)胞裂解液作用下，細(xì)胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA 以及其他成分均擴(kuò)散到電解液中，而核DNA由于分子量太大不能進(jìn)入凝膠而留在原位。電泳過程中，如果DNA沒有損傷，則將停留在原位，染色后呈圓形的熒光團(tuán)，無拖尾出現(xiàn)。如果DNA受損，斷裂的碎片進(jìn)入到凝膠中，在電場的作用下，DNA碎片離開原位向陽極遷移，形成拖尾。DNA受損越嚴(yán)重，斷裂越多，產(chǎn)生的碎片就越多、越小，則向陽極遷移的DNA碎片量就越多，遷移距離也越長，熒光染色后就能看見“彗星”樣尾長并且熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。

這種方法檢測結(jié)果可信度較高，且能夠在成品試劑盒的選擇下得出漂亮的結(jié)果圖片。該種方法的優(yōu)點(diǎn)是具有高靈敏性，研究的細(xì)胞不需處于有絲分裂期。同時，這種技術(shù)只需要少量細(xì)胞。

二、TUNEL檢測—基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷

原位末端標(biāo)記法（TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）是一種檢測凋亡細(xì)胞DNA鏈斷裂片段的方法。細(xì)胞凋亡發(fā)生時，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將DNA降解成片段，在脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下，底物dUTP 或BrDU(無或有熒光標(biāo)記)可連接到DNA斷片的3-OH末端，采用熒光顯微鏡對標(biāo)記物進(jìn)行分析，可以特異精準(zhǔn)的定位出正在凋亡的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)在單細(xì)胞水平檢測凋亡細(xì)胞的DNA碎片。

相關(guān)產(chǎn)品推薦

Biogradetech專注于蛋白質(zhì)組學(xué)和細(xì)胞學(xué)，致力于抗體、蛋白質(zhì)、分析試劑和試劑盒的創(chuàng)新和開發(fā)，成為生命科學(xué)研發(fā)、藥物發(fā)現(xiàn)等領(lǐng)域的關(guān)鍵推動者。我們?yōu)槟峁┳钍艿鞍踪|(zhì)和免疫學(xué)研究用戶歡迎的產(chǎn)品，從蛋白質(zhì)提取定量等基礎(chǔ)免疫學(xué)產(chǎn)品，到免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)用的內(nèi)參標(biāo)記抗體、一抗和二抗。細(xì)胞研究用戶最喜歡的產(chǎn)品，從細(xì)胞狀態(tài)檢測的染料和試劑盒，細(xì)胞器提取試劑盒，細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)染色示蹤劑和細(xì)胞代謝檢測產(chǎn)品，到細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞因子和蛋白質(zhì)檢測試劑盒，只為幫助您的研究事業(yè)!

作為Biogradetech在中國的區(qū)域代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的Biogradetech以及客戶訂制化服務(wù)。歡迎大家隨時聯(lián)系我們。