Digoxigenin-11-dUTP被酶促摻入DNA/cDNA中作為其天然對應(yīng)物dTTP的替代物。隨后使用與辣根過氧化物酶（HRP），堿性磷酸酶（AP）或熒光染料綴合的洋地黃毒苷抗體檢測所得的洋地黃毒苷標(biāo)記的DNA/cDNA探針。通過連接到尿苷C5位的a11原子接頭確保了最佳的底物性質(zhì)和標(biāo)記效率。推薦用于PCR和切口翻譯的洋地黃毒苷-11-dUTP/dTTP比率：35%洋地黃毒苷-11-dUTP/65%dTTP

請注意：洋地黃毒苷-11-dUTP的最佳終濃度可能很大程度上取決于應(yīng)用和測定條件。為了獲得最佳的產(chǎn)品收率和高摻入率，建議對洋地黃毒苷-11-dUTP/dTTP比率進(jìn)行單獨(dú)優(yōu)化。

Digoxigenin-11-dUTP結(jié)構(gòu)式

艾美捷Digoxigenin-11-dUTP，地高辛/二硝基苯酚（NU-803-DIGXS）：

運(yùn)輸：通過凝膠包進(jìn)行運(yùn)輸。

存儲條件：應(yīng)在-20°C的環(huán)境下保存。

短期（累計最多1周）暴露于室溫下是可行的。

保質(zhì)期：自交貨之日起12個月。

分子式：C43H65N4O21P3（自由酸形式）。

分子量：1066.91克/摩爾（自由酸形式）。

精確質(zhì)量：1066.34克/摩爾（自由酸形式）。

純度：高于或等于95%（通過高效液相色譜法測定）。

形態(tài)：在10 mM Tris-HCl溶液中的過濾溶液，分子量截留30 kDa。

顏色：無色至淡黃色。

濃度：1.0 mM至1.1 mM。

pH值：7.5，誤差范圍±0.5。

光譜特性：zui大吸收波長λmax為290納米，摩爾吸光系數(shù)ε為8.8 L·摩爾^-1·厘米^-1（Tris-HCl，pH 7.5）。

應(yīng)用：

生物素-11-dUTP可以通過以下方法嵌入到DNA或cDNA中：

使用Taq聚合酶進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。

利用DNA酶I/DNA聚合酶I進(jìn)行缺口翻譯（Nick Translation）。

使用Klenow exo-進(jìn)行引物延伸（Primer Extension）。

使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal deoxynucleotidyl Transferase，簡稱TdT）進(jìn)行3'端標(biāo)記。

使用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

此外，生物素-11-dUTP還可以通過以下方法嵌入到RNA中：

使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）進(jìn)行3'-端標(biāo)記。

Digoxigenin-11-dUTP，地高辛/二硝基苯酚參考文獻(xiàn)：

[1] Anderson et al. (2005) Incorporation of reporter-labeled nucleotides by DNApolymerases. Biotechniques 38:257.

[2] Jackson et. al (1991) Detection of Shiga Toxin-Producing Shigelladysenteriae Type 1 and Escherichia coli by Using Polymerase Chain Reactionwith Incorporation of Digoxigenin-11-dUTP. J Clin Microbiol. 29 (9):1910.

[3] Dauwerse et al. (1999) Two-colour FISH detection of the inv (16) ininterphase nuclei of patients with acute myeloid leukemia. Br J Haematol106:111.

[4] Wiegant et al. (2008) Probe Labeling and Fluorescence In Situ Hybridization.Current Protocols in Cytometry: Unit 8.3.

[5] Schmitz et al. (2008) Nonradioactive labeling of oligonucleotides in vitrowith the hapten digoxigenin by tailing with terminal transferase. Anal Biochem199:222.

[6] Grimmond et al. (2001) Expression Profiling with cDNA Microarray’s: A User’sPerspective and Guide. In: DNA Microarrays: Gene Expression Applications(Jordan). Springer Verlag Berlin Heidelberg

[7] Rosemeyer et al. (1995) Nonradioactive 3’-end-labeling of RNA molecules ofdifferent lengths by terminal deoxynucleotidyltransferase Anal Biochem224:446.

Digoxigenin-11-dUTP，地高辛/二硝基苯酚相關(guān)產(chǎn)品：

HighFidelity Digoxigenin PCR Labeling Kit, #APP-101-DIGX

Digoxigenin NT Labeling Kit, #PP-310-DIGX