Alpha 1-抗胰蛋白酶（Alpha-1 Antitrypsin，簡(jiǎn)稱(chēng)AAT）是一種由肝臟合成的血漿蛋白，它在人體中扮演著重要的保護(hù)角色，主要功能是抑制多種胰蛋白酶和其他蛋白水解酶的活性，從而保護(hù)肺部組織不受這些酶的破壞。

Alpha 1-抗胰蛋白酶在臨床上的應(yīng)用非常廣泛，它不僅用于治療與AAT缺乏相關(guān)的肺部疾病，如非典型肺炎、囊性纖維化和慢性阻塞性肺病，還可以用于治療其他一些疾病，如肝臟疾病和自身免疫性疾病。此外，Alpha 1-抗胰蛋白酶的濃度測(cè)定也是臨床上評(píng)估肝臟功能和診斷AAT缺乏癥的重要指標(biāo)。

在實(shí)驗(yàn)室研究中，Alpha 1-抗胰蛋白酶也被用作生物標(biāo)記物，用于研究炎癥反應(yīng)、肺纖維化和腫瘤發(fā)展等生物學(xué)過(guò)程。

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒雙抗體夾心ELISA的原理如圖1所示。在該測(cè)定中，樣品中存在的α1-抗胰凝乳蛋白酶（CYT）與抗CYT抗體反應(yīng)，抗CYT抗體已吸附到聚苯乙烯微量滴定孔的表面。通過(guò)洗滌除去未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗CYT抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與先前結(jié)合的CYT形成復(fù)合物。在另一個(gè)洗滌步驟之后，通過(guò)添加顯色底物3,3'，5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合酶的數(shù)量直接隨測(cè)試樣品中CYT的濃度而變化；因此，450 nm處的吸光度是測(cè)試樣品中CYT濃度的量度。測(cè)試樣品中的CYT量可以從標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線中進(jìn)行插值，并針對(duì)樣品稀釋度進(jìn)行校正。

艾美捷人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒：

貨號(hào)  E-80CYT

抗體類(lèi)型 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

反應(yīng)性 人類(lèi)

宿主 山羊

特異性/目標(biāo) Alpha 1-抗胰蛋白酶

尺寸 1.0

檢測(cè)范圍 6.25 納克/毫升 - 400 納克/毫升

靈敏度 2.518納克/毫升

測(cè)定時(shí)間 80 分鐘

樣品類(lèi)型 血漿、血清

貯存 2-8℃

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒組件：

抗體包被的微孔板

酶結(jié)合物檢測(cè)抗體

校準(zhǔn)劑

稀釋液濃縮液

洗滌液濃縮液

色原-底物溶液（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB））

停止液

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒檢測(cè)程序：

1. 所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)以重復(fù)兩次的方式進(jìn)行檢測(cè)。

2. 應(yīng)盡快將標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加載到ELISA孔中，以避免吸光度（OD）讀數(shù)發(fā)生偏移。使用多通道移液器可以減少這種情況的發(fā)生。分別以重復(fù)兩次的方式移液100微升以下標(biāo)準(zhǔn)品：

- 標(biāo)準(zhǔn)品0（0.0 ng/mL）

- 標(biāo)準(zhǔn)品1（6.25 ng/mL）

- 標(biāo)準(zhǔn)品2（12.50 ng/mL）

- 標(biāo)準(zhǔn)品3（25 ng/mL）

- 標(biāo)準(zhǔn)品4（50 ng/mL）

- 標(biāo)準(zhǔn)品5（100 ng/mL）

- 標(biāo)準(zhǔn)品6（200 ng/mL）

- 標(biāo)準(zhǔn)品7（400 ng/mL）

3. 將100微升的樣品（重復(fù)兩次）移液至預(yù)先指定的孔中。

4. 在室溫下孵育微孔板六十（60 ± 2）分鐘。孵育過(guò)程中保持板蓋覆蓋并保持水平。

5. 孵育后，抽吸孔中的內(nèi)容物。

6. 用適當(dāng)稀釋的洗滌液完全填充每個(gè)孔，然后抽吸。重復(fù)三次，總共進(jìn)行四次洗滌。如果手動(dòng)洗滌：用洗滌緩沖液完全填充孔，倒轉(zhuǎn)板子然后將內(nèi)容物倒入廢液容器中。隨后在吸水紙上猛烈敲擊孔以去除殘留緩沖液。重復(fù)三次，總共進(jìn)行四次洗滌。

7. 向每個(gè)孔中移液100微升適當(dāng)稀釋的酶-抗體結(jié)合物。在室溫下孵育十五（15 ± 2）分鐘。孵育過(guò)程中保持板蓋覆蓋并保持水平。

8. 如步驟5/6所述進(jìn)行洗滌和拍干孔。

9. 向每個(gè)孔中移液100微升TMB底物溶液。

10. 在黑暗中室溫孵育精確五分鐘。

11. 五分鐘后，向每個(gè)孔中加入100微升停止液。

12. 在30分鐘內(nèi)測(cè)定每個(gè)孔內(nèi)容物的吸光度（450納米）。根據(jù)制造商的規(guī)格校準(zhǔn)板閱讀器。