脂肪酸氧化

脂肪酸每碳提供的ATP比葡萄糖等碳水化合物多。 在具有高能量需求的組織中，例如心臟組織，高達 50 - 70%的能量來自脂肪酸β-氧化，可轉化脂肪 酸制乙酰輔酶A，同時產(chǎn)生FADH2和NADH 線粒體。

這種嚴格的有氧氧化途徑由四個不同的步驟組成： 酰基輔酶A脫氫酶脫氫，烯酰輔酶A水合 水合酶，通過 3-羥基酰輔酶 A 脫氫酶和硫解酶脫氫 β-酮硫醇酶裂解。

研究脂肪酸氧化的重要性

β-氧化系統(tǒng)在人體中的重要性體現(xiàn)在 存在一組被歸類為脂肪酸氧化的遺傳疾病 疾病（FAOD），這是一組異質性脂肪酸缺陷 轉運和氧化，并遺傳為常染色體隱性遺傳病， 具有廣泛的臨床表現(xiàn)。

此外，有證據(jù)表明，糧農(nóng)組織在糧農(nóng)組織活動期間的監(jiān)管 胎兒發(fā)育不僅對胎兒生命很重要，而且 對成年期健康和疾病的影響。糧農(nóng)組織的衡量標準 因此，活動為病理生理學和病理學提供了有價值的見解 許多疾病的代謝基礎。

檢測精靈非放射性 糧農(nóng)組織的測定基于底物辛酰輔酶A的氧化。生成 NADH與四唑鹽INT還原為甲胺素偶聯(lián)。 紅色甲臜的強度與糧農(nóng)組織的增加成正比 活動。測定溶液和底物應等分儲存在 -80°C.

Assay Genie檢測精靈脂肪酸氧化檢測試劑盒是一種高度靈敏的試劑盒 用于定量測量脂肪酸的比色法 細胞和組織中的氧化。

這種獨特的檢測方法利用 高可溶性辛酰輔酶A底物，可實現(xiàn) 脂肪酸氧化與長鏈低溶性的測量 底物如18C不飽和脂肪酸油酸酯。

上圖：脂肪酸氧化測定：組織 裂解物由健康的倉鼠心臟和 與心力衰竭相關的TO2倉鼠模型。裂解物 用于測定和脂肪酸氧化水平 量化。

下圖：脂肪酸氧化測定： 辛酰輔酶A是底物，而不是反應的產(chǎn)物。請 見圖。

細胞/組織提取物的制備：

1.用冰冷的磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）洗滌~106細胞兩次， 并從細胞沉淀中完全去除PBS。細胞沉淀應 儲存在-80?C.組織樣品應用PBS徹底洗滌至 去除血細胞，這可能導致檢測結果不一致。

2.通過稀釋 1x 細胞裂解液制備足夠的 10x 細胞裂解液 用冰冷的dH 2 O溶液。加入 50 – 100 μl 冰冷的 1x 細胞裂解 細胞沉淀溶液。通過上下移液提取細胞 （溫和但徹底）。將裂解物留在冰上5分鐘 間歇性輕微激動。如果裂解物是粘稠的，添加更多的1x細胞 裂解溶液并重復移液。在 以最大速度冷藏微量離心機5分鐘。回收上清液 用于測定。將組織在 1x 細胞裂解液中勻漿，并裂解 通過離心澄清。每 25.0 毫升 5x 使用 ~1 毫克組織 用于組織勻漿的細胞裂解溶液。

3.進行蛋白質測定以確定樣品蛋白質濃度。 通過用冰冷的 1x 稀釋來標準化樣品蛋白質濃度 細胞裂解液至1 – 3毫克/毫升。將蛋白質樣品完全保存在冰上 次。凍融的粗蛋白裂解物可表現(xiàn)出酶還原 活動。裂解物應儲存在-80?C。 注意：不要使用緩沖液 含有還原劑或SDS。

試劑解凍：

將解凍的糧農(nóng)組織化驗溶液和20倍糧農(nóng)組織底物放在冰上。輕輕攪拌 移液前的溶液。重要的是要盡量減少時間 試劑解凍。使用后立即冷凍溶液。

對照溶液和反應溶液的制備：

1.對照溶液由1份dH 2 O和20份混合制備 糧農(nóng)組織化驗解決方案，例如25μldH 2 O與500μlFAO化驗混合 溶液。測定過程中將新鮮制備的對照溶液保持在冰上。

2.反應溶液通過混合1份20x FAO底物和 20份糧農(nóng)組織化驗溶液，例如25μl 20x糧農(nóng)組織底物與 500μl糧農(nóng)組織測定溶液。將溶液放在冰上并立即使用。 每個蛋白質樣品用50μl對照溶液和50μl處理 反應溶液分為兩組。

Assay Genie檢測精靈脂肪酸氧化檢測試劑盒的應用

研究健康和病理狀態(tài)（脂質代謝）的代謝途徑和過程。

信號轉導途徑的研究。

遺傳性疾病的研究，例如脂肪酸氧化障礙（FAODs）*。

心血管疾病的研究，例如心力衰竭。

胎兒發(fā)育過程中細胞能量代謝的研究。

脂肪酸氧化在癌癥代謝中的影響。

*此試劑盒僅供研究使用，不能用于診斷 人類疾病。

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