鏈霉親和素偶聯(lián)物廣泛用于與生物素偶聯(lián)物結(jié)合，以檢測(cè)多種生物靶標(biāo)，如蛋白質(zhì)、核酸和其他分子。它們被用作許多生物檢測(cè)的理想選擇，如免疫熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡和其他生物應(yīng)用，因?yàn)殒溍褂H和素具有很強(qiáng)的親和力結(jié)合生物素，在很寬的pH值和溫度范圍內(nèi)不受影響。

AAT Bioquest/艾美捷提供多種用經(jīng)典熒光染料標(biāo)記的鏈霉親和素偶聯(lián)物（例如：FITC、TRITC、Texas Red?、Cy3?、Cy5? 和 Cy7?），以及我們良好的水溶性、光穩(wěn)定 iFluor 和 mFluor?? 染料。然而，傳統(tǒng)的生物素-親和素檢測(cè)系統(tǒng)仍然受到現(xiàn)有熒光偶聯(lián)物信號(hào)強(qiáng)度有限的限制。鏈霉親和素 Xtra? iFluor 偶聯(lián)物是一個(gè)新的超亮鏈霉親和素偶聯(lián)物家族，具有與 Alexa Fluor 熒光基團(tuán)幾乎相同的激發(fā)和發(fā)射特性，信號(hào)改善 3~5 倍。它是一套強(qiáng)大的工具，用于檢測(cè)細(xì)胞成像或流式細(xì)胞術(shù)中的低豐度靶標(biāo)。iFluor? 488 是 FITC 通道成像中非常常見(jiàn)的綠色熒光顏色之一。

AAT Bioquest鏈霉親和素-Xtra? iFluor? 偶聯(lián)物的合適標(biāo)記程度可產(chǎn)生極為明亮的熒光鏈霉親和素偶聯(lián)物，用于在細(xì)胞成像、流式細(xì)胞術(shù)和蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用中檢測(cè)生物素化抗體。鏈霉親和素-Xtra? iFluor 偶聯(lián)物對(duì)低豐度靶標(biāo)成像，比傳統(tǒng)鏈霉親和素 Alexa Fluor?? 偶聯(lián)物具有更高的靈敏度和細(xì)節(jié)。

示例協(xié)議:

1、儲(chǔ)備溶液的制備:

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)

鏈霉親和素-Xtra? IF488儲(chǔ)備溶液（1mg / mL）

向小瓶中加入 100 μL（對(duì)于 Cat# 46000）或 1 mL（對(duì)于 Cat# 46001）的 ddH 2 O，以制備 1 mg/mL 儲(chǔ)備溶液。

注意：該構(gòu)成的儲(chǔ)備溶液將在含有 0.2% BSA 的 PBS 中。

2、工作溶液的制備:

鏈霉親和素-Xtra?工作溶液

對(duì)于IF，建議的染色濃度為1-5 ug/ml。對(duì)于 FACS，染色緩沖液中的建議濃度為 0.1-0.5 ug / 100 uL / 百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。

注意：PBS+0.1%BSA可用作染色緩沖液。

注意：為了獲得每種應(yīng)用的合適的性能，需要仔細(xì)確定該試劑的最佳濃度。

注意：建議的工作稀釋度僅供參考。建議用戶在測(cè)試中使用適當(dāng)?shù)年?yáng)性和陰性對(duì)照滴定產(chǎn)品。

3、樣品實(shí)驗(yàn)方案:

根據(jù)制造商的建議，用目標(biāo)抗體封閉和處理樣品。

在樣品中以適當(dāng)?shù)臐舛群统掷m(xù)時(shí)間加入生物素偶聯(lián)的二抗工作溶液。

注意：請(qǐng)驗(yàn)證您的生物素偶聯(lián)抗體與實(shí)驗(yàn)中使用的一抗的相容性和類型。例如，如果一抗是小鼠抗體，則可以使用與生物素結(jié)合的山羊抗小鼠抗體進(jìn)行測(cè)定。

將細(xì)胞與鏈霉親和素-Xtra? 工作溶液在室溫下孵育 30 分鐘至 1 小時(shí)。注意：需要仔細(xì)確定合適孵育時(shí)間。

取出工作溶液，將細(xì)胞重懸于您選擇的緩沖液中。

使用熒光顯微鏡拍攝圖像或使用流式細(xì)胞儀記錄強(qiáng)度。

AAT Bioquest鏈霉親和素-Xtra? IF488圖像示例：

圖 1. 用鏈霉親和素-Xtra? iFluor 偶聯(lián)物和鏈霉親和素 Alexa Fluor? ? 偶聯(lián)物染色的 Hela 細(xì)胞圖像。

Hela 細(xì)胞用 4% 多聚甲醛固定 30 分鐘，用 0.02% Triton? X-100 透化 10 分鐘，用 1% BSA 封閉 1 小時(shí)。然后用 1 μg/mL α 微管蛋白小鼠單克隆抗體在室溫下對(duì)固定的 Hela 細(xì)胞染色 1 小時(shí)，然后用 GxM IgG-生物素 （Cat# 16729） 染色，然后用鏈霉親和素-Xtra? iFluor 488 和鏈霉親和素-Alexa Fluor? 488 進(jìn)行可視化。用 Hoechst 33342（藍(lán)色，貨號(hào)#17535）對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色。

艾美捷科技是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。