近期, Deyan等發(fā)表的標(biāo)題為“Protective Roles for Fibrin, Tissue Factor, Plasminogen Activator Inhibitor-1, and Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor, but Not Factor XI, during Defense against the Gram-Negative Bacterium Yersinia enterocolitica”，發(fā)表在《The Journal of Immunology》期刊上。這篇文章的核心內(nèi)容是研究在防御革蘭氏陰性細(xì)菌耶爾森腸炎桿菌（Yersinia enterocolitica）感染過(guò)程中，纖維蛋白、組織因子（TF）、纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）和凝血酶激活的纖溶抑制劑（TAFI）等凝血因子的保護(hù)作用，而因子X(jué)I則沒(méi)有保護(hù)作用。文章指出，在敗血癥感染中，凝血途徑的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致凝血病。盡管抗凝治療通常無(wú)法保護(hù)人類免受敗血癥病理的影響，但本研究的數(shù)據(jù)可能有助于解釋這一差異，即在宿主防御過(guò)程中，導(dǎo)致纖維蛋白沉積的凝血途徑具有關(guān)鍵的保護(hù)作用.

方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

使用了C57BL/6野生型小鼠以及基因敲除小鼠，包括纖維蛋白原敲除小鼠、PAI-1敲除小鼠、因子X(jué)I敲除小鼠和TAFI敲除小鼠等。

低TF活性小鼠（low-TF mice）是通過(guò)基因靶向技術(shù)使小鼠TF基因失活，并表達(dá)人類TF轉(zhuǎn)基因，從而具有低水平的TF活性。

PAI-1/TAFI雙敲除小鼠是在Trudeau研究所生成的。

細(xì)菌感染

使用Y. enterocolitica菌株WA（血清型O:8），在26℃下培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期早期，然后在含有20%甘油的BHI肉湯中重懸并儲(chǔ)存于-70℃。

通過(guò)腹腔注射（i.p.）或靜脈注射（i.v.）的方式將細(xì)菌接種到小鼠體內(nèi)，以研究不同感染途徑下的反應(yīng)。

生存率和細(xì)菌負(fù)荷測(cè)量

每天監(jiān)測(cè)小鼠的生存情況，對(duì)無(wú)反應(yīng)或臥倒的小鼠視為瀕死并進(jìn)行安樂(lè)死。

通過(guò)在BHI瓊脂上涂布組織勻漿的稀釋液并計(jì)數(shù)菌落形成單位（CFU）來(lái)測(cè)量細(xì)菌負(fù)荷。

血液參數(shù)、纖維蛋白沉積和肝臟PT及PA活性測(cè)量

通過(guò)心臟穿刺收集血液，測(cè)量血細(xì)胞比容和血小板數(shù)量。

通過(guò)ELISA測(cè)量血漿中的D-二聚體水平，并通過(guò)Western blot定量肝臟組織中的纖維蛋白水平。

使用特定的試劑盒和方法測(cè)量肝臟組織中的凝血酶原酶（PT）和纖溶酶原激活物（PA）活性。

實(shí)驗(yàn)

纖維蛋白原對(duì)腹腔炎癥反應(yīng)的影響：

通過(guò)比較纖維蛋白原敲除小鼠和對(duì)照小鼠在感染Y. enterocolitica后的腹腔滲出液中的炎癥介質(zhì)和細(xì)胞數(shù)量，發(fā)現(xiàn)纖維蛋白原敲除小鼠的炎癥反應(yīng)減弱，中性粒細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)菌負(fù)荷增加。

纖維蛋白在腹腔耶爾森病中的保護(hù)作用：

纖維蛋白原敲除小鼠在感染亞致死劑量的Y. enterocolitica后，生存率顯著降低，肝臟和脾臟中的細(xì)菌負(fù)荷增加。

使用華法林處理的野生型小鼠也表現(xiàn)出類似的表型，表明纖維蛋白在防御革蘭氏陰性腹膜炎中具有保護(hù)作用。

纖維蛋白在全身耶爾森病中的保護(hù)作用：

通過(guò)靜脈注射Y. enterocolitica，發(fā)現(xiàn)纖維蛋白原敲除小鼠的生存率顯著降低，肝臟和脾臟中的細(xì)菌負(fù)荷增加，表明纖維蛋白在全身感染中也具有保護(hù)作用。

纖維蛋白沉積的動(dòng)態(tài)變化：

在野生型小鼠感染Y. enterocolitica后，肝臟中的纖維蛋白沉積在感染的第5天達(dá)到峰值，與細(xì)菌負(fù)荷最大值相吻合。

TF和FXI在耶爾森病中的作用：

低TF活性小鼠在感染后表現(xiàn)出增加的細(xì)菌負(fù)荷和降低的生存率，而因子X(jué)I敲除小鼠則沒(méi)有表現(xiàn)出這些表型，表明TF依賴的外源凝血途徑在宿主防御中起主導(dǎo)作用。

PAI-1和TAFI在耶爾森病中的協(xié)同保護(hù)作用：

PAI-1和TAFI的表達(dá)在感染過(guò)程中增加，且PAI-1/TAFI雙敲除小鼠在感染后表現(xiàn)出更高的細(xì)菌負(fù)荷和更低的生存率，表明PAI-1和TAFI在調(diào)節(jié)纖溶過(guò)程中具有協(xié)同作用。

結(jié)論

文章的結(jié)論是，在防御耶爾森腸炎桿菌感染的過(guò)程中，纖維蛋白、組織因子、纖溶酶原激活物抑制劑-1和凝血酶激活的纖溶抑制劑具有關(guān)鍵的保護(hù)作用，而因子X(jué)I則沒(méi)有保護(hù)作用。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了在革蘭氏陰性敗血癥期間，針對(duì)主要的凝血酶生成或抗纖溶途徑的治療可能會(huì)破壞纖維蛋白介導(dǎo)的宿主防御。因此，在開(kāi)發(fā)治療敗血癥的藥物時(shí)，需要充分考慮凝血途徑在感染中的調(diào)節(jié)作用，以確保既能有效抑制凝血病，又不破壞保護(hù)性的纖維蛋白沉積.

Enzyme Research Laboratories品牌產(chǎn)品的作用和價(jià)值：

在實(shí)驗(yàn)中，Enzyme Research Laboratories品牌的以下產(chǎn)品發(fā)揮了重要作用：

Human Prothrombin(人凝血酶原)(Cat# HP 1002): 

在測(cè)量肝臟組織中的凝血酶原酶（PT）活性時(shí)，使用了人凝血酶原來(lái)進(jìn)行體外測(cè)定。凝血酶原是凝血過(guò)程中關(guān)鍵的前體蛋白，通過(guò)與組織因子和因子VIIa復(fù)合物相互作用，啟動(dòng)外源凝血途徑，最終轉(zhuǎn)化為凝血酶，促進(jìn)纖維蛋白的形成。在實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)將人凝血酶原與小鼠肝臟切片共孵育，可以定量測(cè)量凝血酶的生成，從而評(píng)估肝臟組織的凝血活性。

Purified Human a-Thrombin(純化的人凝血酶)(Cat# HT 1002a):

作為凝血酶活性測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)品，純化的人凝血酶用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便準(zhǔn)確測(cè)量實(shí)驗(yàn)中生成的凝血酶水平。凝血酶是凝血過(guò)程中的關(guān)鍵酶，能夠催化纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不溶性纖維蛋白，形成血栓。通過(guò)與Spectrozyme TH試劑反應(yīng)，可以定量測(cè)量凝血酶的活性，從而評(píng)估肝臟組織的凝血功能。

Human Glu-Plasminogen(人Glu-纖溶酶原)(Cat# HT 1002a):

在測(cè)量肝臟組織中的纖溶酶原激活物（PA）活性時(shí)，使用了人Glu-纖溶酶原作為底物。纖溶酶原是纖溶系統(tǒng)中的關(guān)鍵前體蛋白，通過(guò)纖溶酶原激活物的作用，轉(zhuǎn)化為纖溶酶，進(jìn)而降解纖維蛋白，溶解血栓。在實(shí)驗(yàn)中，將人Glu-纖溶酶原與小鼠肝臟切片共孵育，可以定量測(cè)量纖溶酶的生成，從而評(píng)估肝臟組織的纖溶活性。

Human Plasmin(人纖溶酶)(Cat# HPlasmin):

作為纖溶酶活性測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)品，純化的人纖溶酶用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便準(zhǔn)確測(cè)量實(shí)驗(yàn)中生成的纖溶酶水平。纖溶酶是纖溶系統(tǒng)中的關(guān)鍵酶，能夠降解纖維蛋白，溶解血栓。通過(guò)與Spectrozyme PL試劑反應(yīng)，可以定量測(cè)量纖溶酶的活性，從而評(píng)估肝臟組織的纖溶功能。

這些產(chǎn)品在實(shí)驗(yàn)中的價(jià)值在于，它們?yōu)檠芯咳藛T提供了準(zhǔn)確、可靠的工具來(lái)測(cè)量和分析小鼠肝臟組織中的凝血和纖溶活性。通過(guò)使用這些標(biāo)準(zhǔn)化的試劑，研究人員能夠獲得精確的數(shù)據(jù)，從而深入理解纖維蛋白在宿主防御中的作用機(jī)制，以及凝血和纖溶途徑在感染過(guò)程中的調(diào)節(jié)作用。這對(duì)于開(kāi)發(fā)針對(duì)敗血癥和相關(guān)凝血病的治療策略具有重要意義。