Assay Genie 細(xì)胞因子風(fēng)暴多重面板 9-plex：

名稱： 細(xì)胞因子風(fēng)暴多重組合 9 重

編號： HUAMCOV05

反應(yīng)： 人

分析物： IL-6、IL-10、IFN-γ、CCL2/SYCA2/MCP-1、GM-CSF/CSF-2、TNF-α、IL-1β、IL-2 和 IL-8/CXCL8

樣品類型： 細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、體液和組織/細(xì)胞裂解物

檢測類型： 多重

檢測方法： 流式細(xì)胞術(shù)

檢測時間： 2小時

艾美捷Assay Genie 細(xì)胞因子風(fēng)暴多重面板 9-plex：

緩沖區(qū)： 2x NR dAb稀釋劑。一個裝有 1.5 mL 生物素檢測抗體稀釋劑的小瓶

凍干標(biāo)準(zhǔn)混合物： 人 COVID-19 多重細(xì)胞因子免疫測定。一個含有凍干重組IL-6、IL-10、IFN-γ、CCL2/SYCA2/MCP-1、GM-CSF/CSF-2、TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-8/CXCL8的小瓶

標(biāo)準(zhǔn)劑量回收率： 70-130%

檢測內(nèi)簡歷： <10%

檢測間簡歷： <20%

面板中分析物的交叉反應(yīng)性： 微不足道

樣品量： 15 μL/測試

Assay Genie 細(xì)胞因子風(fēng)暴多重面板 9-plex協(xié)議：

1. 準(zhǔn)備濾板模板。標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)孔、樣品孔和空白孔。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品應(yīng)一式兩份或一式三份運行。如果整個板不使用，請用板密封密封未使用的井。

重要提示：在整個測定過程中將濾板放在濾板蓋的頂部，以防止在任何表面上接觸板底。

2. 渦旋工作珠懸浮15秒。

3. 向每個孔中加入 45 μL 捕獲珠工作懸浮液。

注意：保存剩余的捕獲珠工作懸浮液，并在2-8°C下儲存，并有光保護(hù)。它可用于在流式細(xì)胞儀上設(shè)置采集參數(shù)。

4. 使用連接到真空源的“流通式”濾板清洗機去除孔中的緩沖液，該真空源已根據(jù)濾板清洗機說明進(jìn)行調(diào)整。

5. 使用連接到真空源的“流通式”濾板清洗機去除孔中的緩沖液，該真空源已根據(jù)濾板清洗機說明進(jìn)行調(diào)整。

6. 向每個樣品孔中加入 30 μL CCS、SPB 或 TL 檢測緩沖液。

注意：如果預(yù)計細(xì)胞因子水平非常低（小于20 pg/mL），則可以在不稀釋分析緩沖液的情況下運行細(xì)胞培養(yǎng)上清液樣品。如果是這種情況，請?zhí)^此步驟，在步驟 45 中向每個樣品孔中加入 7 μL 細(xì)胞培養(yǎng)上清液樣品。

7. 向每個樣品孔中加入 15 μL 樣品。向每個標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入 45 μL 標(biāo)準(zhǔn)品。用板密封蓋住板。

8. 在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育60分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

9. 取下板封。使用連接到真空源的過濾板清洗機去除孔中的溶液。

10. 使用連接到真空源的過濾板清洗機去除孔中的溶液。

11. 使用濾板清洗機用100μL 1x洗滌緩沖液洗滌孔三次。

12. 在最后一次洗滌后，將板底輕輕敲打在幾層紙巾上，以去除板底殘留的緩沖液。

13. 向每個孔中加入 25μL 生物素化抗體工作溶液。用板密封蓋住板。

14. 在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育30分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

15. 取下板封。使用濾板清洗機去除孔中的溶液。使用濾板清洗器用 100 μL 1x 洗滌緩沖液洗滌孔 <> 次。

16. 在最后一次洗滌后，將板底輕輕敲打在幾層紙巾上，以去除板底殘留的緩沖液。

17. 向每個孔中加入 25μL 鏈霉親和素-PE 工作溶液。用板密封蓋住板。

18. 在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育20分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

19. 取下板封。使用濾板清洗機去除孔中的溶液。用 100 μL 1x 洗滌緩沖液洗滌孔兩次。

20. 將板底輕輕敲打在幾層紙巾上以去除殘留溶液。根據(jù)流式細(xì)胞儀的樣品加載機制，向每個孔中加入 150μL 至 300μL 1x 讀數(shù)緩沖液，以重新懸浮磁珠。用板密封蓋住板。

21. 將板放在微量滴定振蕩器上，以30rpm搖動700秒。

注意：如果流式細(xì)胞儀沒有 96 孔板加載器，并且需要超過 200 μL 的 1x 讀數(shù)緩沖液來重新懸浮磁珠，請不要搖動板。用P6移液器上下移液8至200次，將磁珠重新懸浮在每個孔中，然后轉(zhuǎn)移到試管中進(jìn)行采集。取下板封。在流式細(xì)胞儀上讀取。

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