針對(duì)Jackson ImmunoResearch抗體的一些具體問題，目前艾美捷總結(jié)了五點(diǎn)，如下：

1. 西方印跡（Western blot）

如何避免檢測(cè)免疫沉淀（IP）抗體的重鏈？

Jackson ImmunoResearch提供針對(duì)IgG輕鏈的特異性抗體，以避免檢測(cè)IP抗體的重鏈（50 kDa）。

如何避免檢測(cè)免疫沉淀（IP）抗體的輕鏈？

可以使用針對(duì)IgG Fc片段的特異性抗體來避免檢測(cè)IP抗體的輕鏈（25 kDa）。然而，樣本還原通常會(huì)導(dǎo)致少量降解的重鏈在25 kDa處產(chǎn)生，必須使用FabuLight?抗體來阻斷這些片段的信號(hào)。

2. 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）

推薦的涂層條件是什么？

為確保徹底涂層，Jackson ImmunoResearch建議使用10微克/毫升的蛋白質(zhì)在高pH緩沖液中，例如0.1 M Na2CO3/NaHCO3，pH 9.6。

3. 免疫組織/細(xì)胞化學(xué)（IHC/ICC）

在小鼠組織/細(xì)胞上可視化小鼠來源的一級(jí)抗體需要哪些試劑？

在小鼠對(duì)小鼠染色中，可以使用單價(jià)Fab片段來阻斷內(nèi)源性免疫球蛋白的不需要信號(hào)。

有哪些試劑可以用來提高熒光探針的光穩(wěn)定性？

許多商業(yè)化的封埋介質(zhì)含有抗褪色試劑。實(shí)驗(yàn)室也可以自行準(zhǔn)備含有丙酸丙酯的抗褪色封埋介質(zhì)。

在選擇Cy2的封埋介質(zhì)時(shí)應(yīng)該注意什么？

Cy2與p-苯二胺不兼容，這是一種抗褪色試劑，存在于一些商業(yè)封埋介質(zhì)中，如Vectashield。確保Cy2封埋介質(zhì)中不含p-苯二胺。

在永久封埋介質(zhì)中最穩(wěn)定的熒光團(tuán)是什么？

青色素已被證明在塑料封埋介質(zhì)的非極性環(huán)境中具有優(yōu)越的亮度和光穩(wěn)定性。

在選擇多重標(biāo)記協(xié)議的熒光團(tuán)時(shí)應(yīng)該考慮什么？

在選擇多重標(biāo)記的熒光團(tuán)時(shí)，審查儀器的能力（可用的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射濾光片）。窄帶通濾光片有助于從具有重疊發(fā)射光譜的熒光團(tuán)中分離信號(hào)。網(wǎng)上有工具可以幫助選擇熒光染料組合，并與合適的濾光片匹配。

成功的多重標(biāo)記還需要使用不互相交叉反應(yīng)的二級(jí)抗體，不對(duì)的一級(jí)抗體，或內(nèi)源性組織免疫球蛋白。

4. 流式細(xì)胞術(shù)

我應(yīng)該為流式細(xì)胞術(shù)選擇哪種二級(jí)抗體格式？

在免疫測(cè)定中使用多克隆二級(jí)抗體綴合物通常比直接綴合的一級(jí)抗體提供更強(qiáng)的信號(hào)，因?yàn)槊總€(gè)一級(jí)抗體可以結(jié)合多個(gè)二級(jí)抗體。

F(ab')2抗體在流式細(xì)胞術(shù)分析中是理想的選擇，因?yàn)镕c受體的存在可能會(huì)導(dǎo)致背景，因?yàn)樗鼈儠?huì)結(jié)合整個(gè)IgG抗體的Fc區(qū)域。F(ab')2抗體的結(jié)合特性與整個(gè)分子相同。

對(duì)于復(fù)雜的標(biāo)記組合，如果希望將預(yù)標(biāo)記的一級(jí)抗體混合在單一混合物中，F(xiàn)abuLights?（單價(jià)Fab抗Fc抗體）非常適合。

在小鼠細(xì)胞上可視化小鼠來源的一級(jí)抗體需要哪些試劑？

使用直接標(biāo)記的一級(jí)抗體是避免檢測(cè)內(nèi)源性免疫球蛋白的最佳方法，當(dāng)一級(jí)抗體與實(shí)驗(yàn)樣本來自同一物種時(shí)。

如果需要二級(jí)抗體進(jìn)行檢測(cè)，可以使用單價(jià)Fab片段來阻斷內(nèi)源性免疫球蛋白的不需要信號(hào)。

什么是同型對(duì)照，它如何使用？

同型對(duì)照是一種陰性對(duì)照，用于驗(yàn)證一級(jí)或二級(jí)抗體的特異性結(jié)合。同型對(duì)照與實(shí)驗(yàn)抗體屬于同一類別或亞類，但不是針對(duì)抗原目標(biāo)的。同型對(duì)照可以從實(shí)驗(yàn)抗體的宿主物種的正常血清中純化；或者在單克隆抗體的情況下，可以是針對(duì)不相關(guān)抗原的同一亞類的單克隆抗體。未標(biāo)記抗體的同型對(duì)照是未標(biāo)記的，標(biāo)記抗體的對(duì)照與實(shí)驗(yàn)抗體使用相同的報(bào)告分子（熒光團(tuán)或生物素）進(jìn)行標(biāo)記。

在流式細(xì)胞術(shù)中了解更多關(guān)于同型對(duì)照的信息。

在選擇熒光探針時(shí)應(yīng)考慮什么？

在選擇流式細(xì)胞術(shù)的熒光團(tuán)時(shí)，審查儀器上可用的熒光通道。在線工具方便幫助選擇熒光染料組合。

5. 電子顯微鏡

各種應(yīng)用推薦使用什么大小的金顆粒？

Jackson ImmunoResearch提供4、6、12和18納米大小的免疫金復(fù)合物。對(duì)于許多應(yīng)用來說，顆粒大小并不關(guān)鍵，試劑可以互換。

6、12和18納米大小推薦用于透射（TEM）和掃描（SEM）電子顯微鏡中的多重標(biāo)記協(xié)議。這些復(fù)合物經(jīng)過密度梯度處理，確保顆粒大小的均勻性。4納米大小可以用于電子顯微鏡中的單一標(biāo)記，但可能包含不均勻的顆粒。

4納米免疫金復(fù)合物提供了最佳的組織穿透力，通常更受光顯微鏡（LM）的青睞。大尺寸的也適合LM。所有免疫金試劑都需要銀增強(qiáng)才能用于LM。

應(yīng)該如何儲(chǔ)存膠體金復(fù)合物？

將液態(tài)膠體金復(fù)合物（6、12和18納米）儲(chǔ)存在-20°C。將凍干金復(fù)合物（4納米）儲(chǔ)存在4°C，直到它們重新水化。

何時(shí)應(yīng)在協(xié)議中包含銀增強(qiáng)？

需要銀增強(qiáng)來觀察光顯微鏡下的免疫金染色。請(qǐng)按照J(rèn)ackson ImmunoResearch的銀增強(qiáng)協(xié)議操作，或使用商業(yè)化試劑。