孕烯醇酮ELISA試劑盒：用于直接定量測定人血清中孕烯醇酮的酶免疫分析。

艾美捷孕烯醇酮ELISA試劑盒：

貨號：KA1912

檢測下限：0.05 ng/mL

適用樣本：血清

樣本體積：50 ?L

標(biāo)記：HRP結(jié)合物

檢測方法：比色法

監(jiān)管狀態(tài)：僅供研究使用（RUO）

應(yīng)用：定量

儲存說明：將試劑盒儲存于4℃。

僅供研究使用（RUO）

孕烯醇酮ELISA試劑盒檢測原理：

未標(biāo)記抗原（存在于標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣本中）與酶標(biāo)記抗原（結(jié)合物）之間競爭有限數(shù)量的抗體結(jié)合位點，這些位點位于微孔板上。洗滌和傾倒步驟可去除未結(jié)合的物質(zhì)。洗滌步驟后，加入酶底物。通過加入終止液來終止酶促反應(yīng)。在微孔板讀數(shù)器上測量吸光度。形成的顏色強度與樣本中孕烯醇酮的濃度成反比。使用一系列標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可直接從該曲線讀取樣本和對照品中孕烯醇酮的濃度。

儲存說明：

將整套試劑盒儲存在2-8℃。在這些條件下，未開封的試劑瓶或標(biāo)簽所示的試劑盒在12個月內(nèi)穩(wěn)定。標(biāo)準(zhǔn)品和對照品：一旦打開，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)在14天內(nèi)使用，或分裝后冷凍保存。避免多次凍融循環(huán)。

所需材料但未提供

? 精確移液器，用于分取50、100、150和300 ?L

? 一次性移液槍頭

? 蒸餾水或去離子水

? 振蕩器

? 具有450 nm濾光片和3.0或更高上限吸光度（OD）的微孔板讀數(shù)器（見測定步驟10）。

試劑準(zhǔn)備：

? 洗滌緩沖液濃縮液（10x）

使用前用蒸餾水或去離子水稀釋1:10。如果整個板都將使用，將50 mL洗滌緩沖液濃縮液稀釋在450 mL水中。

? 孕烯醇酮-辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合物濃縮液（50x）

使用前用測定緩沖液稀釋1:50（例如，40 μL HRP加入2 mL測定緩沖液中）。如果整個板都將使用，將240 μL HRP稀釋在12 mL測定緩沖液中。丟棄剩余部分。

樣本準(zhǔn)備：

? 標(biāo)本收集和儲存

每個重復(fù)測定需要約0.2 mL血清。將4-5 mL血液收集到適當(dāng)標(biāo)記的試管中，讓其凝固。離心并小心移除血清層。若分析將在稍后進(jìn)行，可在4℃下儲存長達(dá)24小時，或在-10℃或更低溫度下儲存。將所有人類標(biāo)本視為可能的生物危害材料，并在處理時采取適當(dāng)預(yù)防措施。

? 標(biāo)本預(yù)處理

本測定為直接系統(tǒng)；無需標(biāo)本預(yù)處理。

測定步驟：

所有試劑在使用前必須達(dá)到室溫。標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣本應(yīng)進(jìn)行重復(fù)測定。一旦開始操作，所有步驟應(yīng)不間斷完成。

準(zhǔn)備孕烯醇酮-HRP結(jié)合物和洗滌緩沖液的工作溶液。

取出所需數(shù)量的微孔條。重新封口并將未使用的微孔條放回冰箱。

將每個標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣本的50 μL分別加入相應(yīng)標(biāo)記的微孔中，進(jìn)行重復(fù)測定。

向每個微孔中加入100 μL結(jié)合物工作溶液。（推薦使用多通道移液器）。

在室溫下，于振蕩器（約200 rpm）上孵育1小時。

用稀釋的洗滌緩沖液洗滌微孔3次，每次300 ?L/孔，并將板用力敲擊在吸水紙上以確保干燥（推薦使用洗滌器）。

向每個微孔中加入150 μL TMB底物。

在室溫下，于振蕩器上孵育10-15分鐘（或直至標(biāo)準(zhǔn)品A達(dá)到所需的OD值的深藍(lán)色）。

與步驟7相同的時間間隔，向每個微孔中加入50 μL終止液。

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在加入終止液后20分鐘內(nèi)，用微孔板讀數(shù)器在450 nm處讀取吸光度。

注意：如果OD值超過檢測上限，或者沒有450 nm濾光片，可以使用405或415 nm濾光片替代。吸光度會較低，但這不會影響樣本/對照品的結(jié)果。

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于說明，不應(yīng)用于計算未知量。每次進(jìn)行測定時，應(yīng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

孕烯醇酮ELISA試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Abraham GE, et al. Radioimmunoassay of Plasma Pregnenolone, 17-hydroxy-pregnenolone and

Dehydroepiandrosterone Under Various Physiological Conditions.?J Clin Endocrinol Metab. 1973;

37(1):140–4.

2. Hill M, et al. Age Relationships and Sex Differences in Serum Levels of Pregnenolone and 17-

hydroxypregnenolone in Healthy Subjects; Clin Chem Lab Med. 1999; 37(4):439–47.

3. Robel P, et al. Biosynthesis and Assay of Neurosteroids in Rats and Mice. J Steroid Biochem Mol Biol.1995;53:355–60.