自噬是細胞質(zhì)物質(zhì)的溶酶體降解途徑，在細胞應(yīng)激期間被激活。在被病毒感染或氨基酸饑餓等應(yīng)激信號誘導后，自噬的第一步是形成自噬體。發(fā)表最多的自噬體標記蛋白是MAP LC3，它與自噬體的內(nèi)限制膜和外限制膜相關(guān)。

蛋白質(zhì)印跡法可以看到兩種形式的LC3：LC3I存在于可溶性級分中，LC3II存在于膜級分中。這兩種形式都可見于健康細胞，但在自噬過程中LC3II的比例急劇增加。

LC3是一種16-18kDa的小蛋白，在細胞內(nèi)以3種形式存在。125個氨基酸的前體被切割成120個氨基酸的形式，稱為LC3-I。在與磷脂酰乙醇胺（PE）結(jié)合后，產(chǎn)生LC3-II形式。LC3-I主要存在于胞質(zhì)溶膠中，而LC3-II主要存在于膜部分中。

在通過應(yīng)激信號（如氨基酸饑餓）誘導自噬后，第一步是形成自噬體。LC3-I和LC3-II都存在于健康細胞中，但在自噬誘導后，LC3-II的比例隨著與自噬體膜的結(jié)合而增加。

艾美捷代理Cell Biolabs自噬ELISA檢測試劑盒(LC3-II定量)使用選擇性透化程序來去除胞漿pro-LC3和LC3-I，并保留自噬體膜結(jié)合的LC3-II。未知裂解物中LC3-II的量通過與已知LC3標準曲線進行比較來確定。特點如下：

1、在耗盡胞質(zhì)LC3-I后定量細胞裂解物中的LC3-II

2、包含重組LC3標準品

艾美捷Cell Biolabs的細胞自噬ELISA試劑盒（LC3-II Quantation）是一種用于檢測和定量培養(yǎng)細胞中LC3的酶免疫分析。該試劑盒利用選擇性滲透程序去除胞漿前LC3和LC3-I，并保留自噬體膜結(jié)合的LC3-II（圖1）。在固定和透化后，用抗LC3抗體探測含有LC3-II的細胞，然后用HRP綴合的第二抗體探測。每個試劑盒提供足夠的試劑來進行多達48次測定。

圖1:LC3的處理。在自噬過程中，前-LC3經(jīng)歷C末端蛋白水解形成LC3-I（胞漿）。LC3-I蛋白與磷脂酰乙醇胺（PE）結(jié)合并易位到自噬體膜（LC3-II）。選擇性透化程序用于去除胞質(zhì)前LC3/LC3-I并保留自噬體結(jié)合的LC3-II。LC3-II被用作自噬的特異性標記

試劑盒組成：

1. 100X Cytosolic LC3 Removal Reagent (Part No. 51171A): One 100 ?L tube.

2. 2X Fixing Solution (Part No. 51172B): One 10 mL bottle containing 8% paraformaldehyde.

3. Quenching Solution (Part No. 51173B): One 10 mL bottle.

4. Anti-LC3 Antibody (Part No. 51174C): One 10 ?L tube.

5. Secondary Antibody, HRP Conjugate (1000X) (Part No. 231009): One 20 ?L tube.

6. Assay Diluent (Part No. 310804): One 50 mL bottle.

7. 10X Wash Buffer (Part No. 310806): One 100 mL bottle.

8. Substrate Solution (Part No. 310807): One 12 mL amber bottle.

9. Stop Solution (Part. No. 310808): One 12 mL bottle.

10. Cell Stain Solution (Part No. 11002): One 10 mL bottle.11. Extraction Solution (Part No. 11003): One 10 mL bottle

相關(guān)研究：

1.CBA-401: GFP-LC3 Expression Vector

2.CBA-5115: Autophagy Immunoblot Kit (LC3-II Detection)

3. CBA-5116: Autophagy ELISA Kit (LC3-II Quantitation)

艾美捷科技是Cell Biolabs的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。