鐵（分子量55.845克/摩爾）是一種在所有已知生物體的各種代謝過程中都必不可少的元素。其中最重要的過程包括電子傳遞、氧氣運輸和DNA合成。鐵最常見的存在形式是鐵-硫中心和各種血紅素。與其他大多數(shù)通過吸收和排泄來調(diào)節(jié)水平的離子不同，體內(nèi)的鐵水平僅通過吸收過程來控制。AkrivisBio的鐵檢測試劑盒是一種簡單直接的方法，用于測定樣本中的亞鐵離子（Fe??）。在檢測中，樣本中存在的鐵化合物可以選擇性地被還原為亞鐵形式（Fe??），然后與FereneS反應(yīng)生成一個在593納米處具有最大吸收峰的穩(wěn)定色素。通過添加一種添加劑來防止銅的干擾。該檢測適用于多種樣本中鐵含量在0到10納摩爾范圍內(nèi)的測定。

艾美捷鐵測定試劑盒：

貨號：MA-0103

規(guī)格：100孔

樣本類型：細(xì)胞或組織裂解液、血清

適用物種：通用（適用于所有物種）

檢測方法：比色法，檢測波長593納米

檢測類型：定量

應(yīng)用：基于微孔板的比色法檢測，用于測量樣本中鐵含量（0-10納摩爾）。

檢測范圍：0-10納摩爾

儲存條件：+4°C

運輸條件：凝膠冷藏包

鐵測定試劑盒檢測組分：

-檢測緩沖液：25毫升，貨號WMMA-0103A

-鐵還原劑：0.7毫升，綠色，貨號MA-0103B

-FereneS：12毫升，貨號NMMA-0103C

-Fe??標(biāo)準(zhǔn)品（100mM）：0.1毫升，黃色，貨號MA-0103D

鐵測定試劑盒檢測原理：

1.鐵化合物被溶解，使所有Fe??和Fe??都可用。Cu??被螯合以去除干擾。

2.可選擇性地添加還原劑將Fe??轉(zhuǎn)化為Fe??（總鐵）或省略（僅還原鐵，F(xiàn)e??）。

3.添加FereneS形成色素。

儲存和處理：

將試劑盒儲存于4°C。使用前將所有組分恢復(fù)至室溫。混合鐵還原劑以溶解在冷凍過程中可能形成的任何沉淀。打開試劑瓶前請短暫離心。

檢測步驟：

1.鐵標(biāo)準(zhǔn)曲線：將10微升100mM的鐵標(biāo)準(zhǔn)品用990微升去離子水稀釋，生成1mM的鐵標(biāo)準(zhǔn)品。將稀釋后的鐵標(biāo)準(zhǔn)品0、2、4、6、8和10微升分別加入96孔板中，生成每孔0、2、4、6、8和10納摩爾的鐵標(biāo)準(zhǔn)品。向每個標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入5微升鐵還原劑，并用鐵檢測緩沖液將所有標(biāo)準(zhǔn)品孔的體積調(diào)整至100微升。

2.樣本測試：

-a.可以直接測試液體樣本（如血清）中的亞鐵（Fe??）、總鐵（Fe??+Fe??）或鐵（Fe??）。每孔最多可加入50微升血清。正常血清中鐵水平約為10-40微摩爾。軟組織或細(xì)胞可以用5-10倍體積的鐵檢測緩沖液（例如，每100毫克濕組織或約5×10?細(xì)胞用500微升鐵檢測緩沖液）進(jìn)行勻漿。用探針超聲儀或Dounce玻璃珠勻漿器充分勻漿組織樣本，然后以16,000×g離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至新的微量離心管中。所有最終讀數(shù)應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。如果任何樣本超出該范圍，應(yīng)適當(dāng)稀釋并重新運行。

-b.僅檢測亞鐵（Fe??）：將1-50微升樣本加入96孔板的樣本孔中，并用鐵檢測緩沖液將體積調(diào)整至每孔100微升。檢測總鐵（Fe??+Fe??）：將1-50微升樣本加入96孔板的樣本孔中。向每個樣本中加入5微升鐵還原劑，將Fe??還原為Fe??。用鐵檢測緩沖液將體積調(diào)整至每孔100微升。

-c.在37°C下，讓Fe??完全還原為Fe??，持續(xù)30分鐘。

-d.向含有鐵標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣本的每個孔中加入100微升鐵探針。充分混合。在37°C下，避光讓顏色完全顯色，持續(xù)60分鐘。

3.測量：在微孔板讀數(shù)器上監(jiān)測593納米處的吸光度。

4.典型結(jié)果：

5.計算：從所有其他標(biāo)準(zhǔn)品和樣本讀數(shù)中減去零標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。將背景校正后的樣本讀數(shù)除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，以獲得每孔中的鐵納摩爾數(shù)。測試樣本中的Fe??和總鐵（Fe??+Fe??）直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線確定。測試樣本中的Fe??含量通過從總鐵（Fe??+Fe??）中減去Fe??來計算。通過以下方法確定原始樣本中的Fe??、Fe??或總鐵（Fe??+Fe??）濃度：

-A.將每孔的納摩爾數(shù)除以加入孔中的樣本體積（微升）=每微升樣本中的鐵納摩爾數(shù)

-B.將每微升樣本中的鐵納摩爾數(shù)乘以上述2a中上清液的總體積=每樣本中的總鐵納摩爾數(shù)

-C.將每樣本中的總鐵納摩爾數(shù)除以用于制備樣本的組織毫克數(shù)或細(xì)胞數(shù)量=每毫克組織（或每細(xì)胞數(shù)量等）中的鐵納摩爾數(shù)