隨著干細胞治療應用的增長，對其移植后體內檢測方法的開發(fā)和完善需求也在增加。磁共振成像已成為追蹤移植干細胞的主要方式之一。MRI的優(yōu)勢在于它是一種非侵入性方法，不沉積電離能量，適合進行縱向研究。為了使用MRI區(qū)分特定細胞，這些細胞必須用磁性對比劑進行標記。目前，最徹底表征的試劑，F(xiàn)eridex，一種FDA批準的用于肝臟成像的超順磁性氧化鐵（SPIO）對比劑，已不再可用。來自Biopal的Molday ION Rhodamine-B TM（MIRB）是一種新型SPIO對比劑，專為細胞標記應用而配制。MIRB的磁性核心和流體動力學尺寸分別大約為8和35納米，Zeta值為-31毫伏，與Rhodamine-B（Rh-B）（每個顆粒2個熒光體）結合，可以通過MRI和熒光顯微鏡觀察。Rh-B的激發(fā)波長為555納米，發(fā)射波長為565-620納米。在這項研究中，我們定性和定量地表征了MIRB在非人靈長類動物（NHP）間充質干細胞（MSC）上的標記和裝載特性，包括在不同標記濃度下的平均內部鐵/MSC，以及細胞內MIRB對MSC活性、增殖能力和功能的影響。我們對MIRB標記的MSC的體外MR特性進行了全面評估，描述了弛豫率測量、最佳成像序列的確定以及在臨床1.5 T西門子交響曲MRI設備上的理想檢測極限。這些研究為新的SPIO對比劑用于細胞標記和體內MRI檢測的未來應用奠定了基礎，并提供了原理證明。

艾美捷Molday ION羅丹明B熒光標記物（BPL-CL-50Q02-6A-50）部分結果分析：

1 細胞標記和裝載特性分析

1.1 細胞內MIRB分布

經過20小時的孵化，觀察到內化的MIRB定位在MSC的細胞質中，特別是在核周體的內吞體中。這種定位模式在光學和熒光顯微鏡下都很明顯，并且適用于所有考慮的標記條件。圖1顯示了通過普魯士藍染色增強的光顯微鏡圖像，用于鐵（Fe）的可視化，以及MSC細胞質中Rh-B的熒光顯微鏡圖像。

1.2 標記效率

標記效率，通過流式細胞儀檢測Rh-B陽性細胞的百分比，對于用5 mg Fe/ml標記的細胞范圍從65.9%，對于用MIRB濃度達到或超過20 mg Fe/ml標記的細胞則超過95%。圖2顯示了在高達100 mg Fe/ml的MIRB濃度下標記的MSC中Rh-B存在的流式細胞術數(shù)據(jù)。

1.3 MIRB攝取量

平均每MSC中內化的MIRB量，以pg Fe計，如圖3所示。平均Fe/MSC的計算是手動在血細胞計數(shù)板上進行的細胞計數(shù)的直接函數(shù)。手動細胞計數(shù)引入的誤差，估計在10-15%（37），代表了主要誤差以及細胞內鐵含量估算的準確性限制。來自六項檢測的數(shù)據(jù)表明，隨著MIRB標記濃度的增加，出現(xiàn)了飽和現(xiàn)象。在20至30 mg Fe/ml之間的標記濃度達到平臺期，結果平均每MSC攝取量約為15-20 pg Fe。

Molday ION羅丹明B熒光標記物部分文獻參考：

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