Hypoxyprobe PAb27 Kit 組件詳解：

Hypoxyprobe-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱和唯一成分為吡唑噻唑鹽酸鹽。Hypoxyprobe?-1的分子量為290.8，水溶性為400毫摩爾，約合116 mg/ml；在0.9%鹽水中的紫外吸收峰為324 nm，消光系數(shù)為7020。自由堿形式的吡唑噻唑分子量為254.3，pKa值為8.7，辛醇-水分配系數(shù)為8.5。

Hypoxyprobe-1在固態(tài)和水溶液中都具有化學(xué)穩(wěn)定性。例如，固態(tài)Hypoxyprobe-1在室溫下避光存放兩年未檢測到降解（通過UV和HPLC分析）。在0.9%鹽水中的Hypoxyprobe-1溶液以100 g/l的濃度在4°C下存放4.5年，亦未檢測到降解（UV和HPLC分析）。吡唑噻唑在缺氧細(xì)胞中被還原激活，激活的中間體與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的巰基形成穩(wěn)定的共價加合物。抗體試劑PAb27HAP與這些加合物結(jié)合，從而實現(xiàn)免疫化學(xué)檢測。

PAb27 HAP是一種高滴度親和純化的兔抗體制劑，能與缺氧細(xì)胞中Hypoxyprobe-1的蛋白加合物結(jié)合。PAb27HAP中含有疊氮化鈉，以增強穩(wěn)定性。通過對冷凍固定或福爾馬林固定的石蠟嵌入切片進(jìn)行免疫組化，可以研究感興趣的組織；也可以使用Western印跡或流式細(xì)胞術(shù)，經(jīng)過組織解離后進(jìn)行分析。注意：PAb27HAP與缺氧細(xì)胞中吡唑噻唑的蛋白、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但免疫組化檢測的組織處理會洗掉小分子肽和氨基酸加合物，因此免疫組化缺氧檢測依賴于缺氧組織中吡唑噻唑的蛋白加合物。

艾美捷PAb27：

貨號：HPB-PAb27

應(yīng)用：用于細(xì)胞和組織缺氧的免疫化學(xué)檢測，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶法、西方 blotting 或流式細(xì)胞術(shù)。當(dāng)將 Hypoxyprobe PAb27 套件與抗兔次級試劑（PAb27 套件中不提供次級試劑）結(jié)合使用時，小鼠組織中的背景非常低。

數(shù)量：

a. Hypoxyprobe-1 PAb27 套件包含 100 mg、200 mg 或 1000 mg 的 Hypoxyprobe-1（吡唑噻唑鹽酸鹽）。小動物研究的典型劑量為 60 mg/kg 體重，而人類研究的典型劑量為 14 mg/kg 體重。

b. 100 mg 和 200 mg 套件各含一瓶（100 和 200 mg 套件）或兩瓶（1000 mg 套件）200 微升的高滴度親和純化抗吡唑噻唑兔抗血清，含有 0.09% 的疊氮鈉和 1% 的 BSA 作為穩(wěn)定劑。PAb27HAP 的最佳稀釋度需由每位研究者自行確定。

不提供：次級抗兔試劑和標(biāo)準(zhǔn) IHC 試劑，如緩沖液、底物和色原等。

存儲：

a. 將 Hypoxyprobe-1 固體在室溫下避光保存（也可在 28 攝氏度下保存）。

b. 將兔 PAb27HAP 存儲在 2-8 攝氏度。切勿冷凍。

Hypoxyprobe PAb27 Kit檢測說明：

對正常或腫瘤組織缺氧的研究始于靜脈輸注、腹腔注射或口服攝入Hypoxyprobe-1溶液。典型劑量為小動物研究60 mg/kg體重，人類研究為14 mg/kg體重。對于一只25克的小鼠，這相當(dāng)于1.5 mg/只。在小鼠中，使用高達(dá)400 mg/kg的劑量沒有檢測到毒性或組織缺氧變化，但60 mg/kg的劑量可提供良好的免疫染色，且成本較低。Hypoxyprobe-1在鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來施用Hypoxyprobe-1。

在注射或攝入后，Hypoxyprobe-1會分布到所有組織，包括大腦，但僅在氧濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中與含巰基的蛋白質(zhì)形成加合物——這相當(dāng)于37°C下的部分壓力pO2 = 10 mmHg。除了腫瘤外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚中也存在氧濃度在10 mmHg及以下的細(xì)胞，這些正常組織會結(jié)合Hypoxyprobe-1。

Hypoxyprobe-1在小鼠中的血漿半衰期約為25分鐘。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，犬為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的小鼠組織可在施用Hypoxyprobe-1后15至90分鐘內(nèi)采集。在采集時，組織中殘留的Hypoxyprobe?-1在組織缺氧時會結(jié)合。然而，殘留的Hypoxyprobe?-1量與組織在15至90分鐘實驗中暴露的量相比非常小，因此任何由于殘留Hypoxyprobe?-1導(dǎo)致的非特異性結(jié)合是不可檢測的。

除了動物研究，Hypoxyprobe 試劑盒還可用于細(xì)胞培養(yǎng)。通常，細(xì)胞懸液在含有100至200微摩爾Hypoxyprobe-1的缺氧環(huán)境中孵育1至2小時。細(xì)胞通過離心收集，固定并使用PAb27HAP及色原或熒光二級試劑進(jìn)行免疫染色。