SYBR Green檢測凍干制劑是為使用熒光DNA染料SYBR Green進行DNA樣本的定量實時分析而設計的。在PCR過程中，主混合物中的熒光染料插入到擴增產物中，使得在不需要合成特異性標記探針的情況下，能夠快速分析目標DNA。它提供了一個易于操作且功能強大的工具，可以在高達6個數量級的寬動態(tài)范圍內，以卓越的靈敏度和精確度對樣本DNA進行定量。

艾美捷SYBR Green檢測凍干制劑/qPCR SybrMaster凍干品（PCR-173S）包含了進行qPCR所需的所有試劑（除了模板、引物和標記熒光探針），全部封裝在單個珠子中。基于優(yōu)化的熱啟動聚合酶，該混合物具有高度的特異性和靈敏度。其活性在常溫下被阻斷，并在初始變性開始時自動激活。熱激活防止了在PCR設置期間低溫下非特異性結合引物和引物二聚體的形成。

推薦的PCR檢測：

1）每種引物的Z佳濃度可以在100至500nM之間變化。

引物混合液的準備：

為12個樣本或4個樣本的三重組合準備13體積的引物混合液，如說明書所述。使用無菌過濾頭的移液管取液，并盡量減少標記的DNA探針暴露于光線下。應在與DNA制備或分析不同的區(qū)域進行設置。在所有應用中都應包括無模板對照（NTC）。

分配主混合物：

徹底振蕩引物/探針混合液以確保均勻性。向每個PCR管或板孔分配15微升。

加入模板DNA：

向每個反應容器中加入5微升的模板DNA（或無模板對照），并蓋緊或密封管子/板。每個反應的最終濃度不要超過200納克DNA。在循環(huán)前應對管子或板進行離心，以去除可能的氣泡。

建議的循環(huán)條件：

2) 退火溫度取決于所使用的引物的熔解溫度。

3) 延伸時間取決于擴增子的長度。建議對最多500堿基對(bp)的片段使用30秒的時間。為了獲得Z佳的特異性和擴增效果，對于每種新的模板DNA和引物對組合，可能需要特別對推薦的參數進行個別優(yōu)化，尤其是退火溫度。