PNA Bio提供定制的CRISPR/Cas9（RGEN）合成服務(wù)，無論是否經(jīng)過驗證。

艾美捷PNA Bio-CRISPR/Cas9（RGEN）合成定制服務(wù)：

IVT sgRNA合成服務(wù)（aRGEN）

包括設(shè)計、脫靶搜索和合成

提供50微克凍干形式的sgRNA

注射/轉(zhuǎn)染就緒

在瓊脂糖凝膠中確認(rèn)質(zhì)量和數(shù)量

時間線：2周

sgRNA載體合成服務(wù)（dRGEN）

包括設(shè)計、脫靶搜索和合成

提供sgRNA和Cas9的表達(dá)質(zhì)粒

時間線：2周

提供與GFP/HygroR和RFP/PuroR卡盒共表達(dá)的Cas9載體，這些載體在CMV或EF1a啟動子下用于篩選

sgRNA驗證服務(wù)

客戶提供基因名稱、物種和項目目標(biāo)（KO、KI等）

包括設(shè)計、脫靶搜索以及4~8個gRNA載體的合成

將CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，并執(zhí)行錯配敏感的核酸酶檢測，以找到Z有效的核酸酶

sgRNA以表達(dá)質(zhì)粒形式（dRGEN）或RNA形式（aRGEN）提供

也提供PCR引物、PCR條件和用于KO篩選的錯配敏感的核酸酶檢測

時間線：3~6周

Cas9載體

CV01 & CV11: Cas9（CMV或EF1a啟動子）

CV02 & CV12: Cas9-HygR-GFP（CMV或EF1a啟動子）

CV03 & CV13: Cas9-RFP-PuroR（CMV或EF1a啟動子）

導(dǎo)向RNA（gRNA）設(shè)計

通常，尋找沒有1個堿基和2個堿基錯配的gRNA序列，并包含45~70% GC含量。如果無法避免脫靶，S選靠近PAM的錯配，而不是位于gRNA 5'端的錯配。請注意，非典型PAM（-NAG，-NGA）也可以被切割。

PNA Bio已經(jīng)開發(fā)了PNA Bio的gRNA工具，它可以輸出脫靶序列、GC含量和其他特征。您也可以使用公開可用的工具進(jìn)行各種選項的搜索。

Cas-Designer

ChopChop

E-CRISP

Cas-Offinder（查看脫靶列表）

eGFP對照sgRNA

已驗證在體外和體內(nèi)切割eGFP

注射就緒形式，凍干粉末

也提供eGFP質(zhì)粒和Cas9蛋白作為體外切割檢測的陽性對照試劑

可用尺寸：20微克或100微克（20微克x 5管）

目錄編號：AR04

PNA Bio-CRISPR/Cas9（RGEN）合成定制服務(wù)文獻(xiàn)：

Laminar flow downregulates Notch activity to promote lymphatic sprouting. Choi D et al. (2017)  J. Clin Investigation. In press.

Generation and characterization of tamoxifen-inducible Pax9-CreER Knock-In Mice using CrispR/Cas9. Jifan F et al. (2016) Genesis 54(9):490-496.

Efficient delivery of nuclease proteins for genome editing in human stem cells and primary cells. Liu J et al. (2015) Nat Protoc. 10:1842-1859.

Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Kim S et al. (2013) Gen Res. 24:1012-1019.

Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection. Liang X et al (2015) J Biotech. 208: 44-53.

艾美捷科技是PNA Bio的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。