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NanoTag Biotechnologies 和 Synaptic Systems 介紹了第一個(gè)PSD95 FluoTag-X2 抗體,它在標(biāo)準(zhǔn)免疫染色應(yīng)用方面例如免疫組織化學(xué)(IHC) (圖1) 和免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC) (圖 2)展現(xiàn)出了穩(wěn)固而可靠的結(jié)果。并且,在附加的抗原提取步驟中,它對(duì)經(jīng)PFA / 福爾馬林固定的,來源于大鼠和小鼠的組織和細(xì)胞沒有任何的要求。
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| 圖1:用FluoTag-X2 抗-PSD95磺化Cy 3 抗體(cat. no. N3702-SC3-L,稀釋比例1 : 500, 紅色),對(duì)自由浮動(dòng)的經(jīng)PFA固定的大鼠海馬體的振動(dòng)切片進(jìn)行間接免疫染色。細(xì)胞核由DAPI染色可見為藍(lán)色。 | 圖2:用FluoTag-X2 抗-PSD95-ATTO 542 抗體(cat. no. N3702-At542-L, 紅色)和FluoTag-X2 抗-GFAP-At488抗體 (cat. no. N3802-At488-L, 綠色),對(duì)經(jīng)PFA固定的大鼠海馬體神經(jīng)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行間接免疫染色。細(xì)胞核由DAPI染色可見為藍(lán)色 |
突觸后致密區(qū)(PSD)
突觸后致密區(qū) (PSD) 是位于突觸后膜,并列于突觸前活躍區(qū)的一個(gè)特殊蛋白致密區(qū)。起初,通過電子顯微鏡,他被鑒定為位于突觸后膜上的電子致密結(jié)構(gòu)(圖3)。突觸后致密區(qū)在突觸間隙充當(dāng)支架結(jié)構(gòu),使神經(jīng)遞質(zhì)受體聚集在靠近突觸前釋放神經(jīng)遞質(zhì)的位置(Banker et al., 1974; Ziff, 1997; Dosemeci et al., 2016)。
由于大腦區(qū)域,活躍狀況,突觸成熟和一些神經(jīng)變性的疾病,突觸后致密區(qū)的大小和成分也有所不同(Meyer et al., 2014; Vyas and Montgomery, 2016)

圖3:大鼠海馬結(jié)構(gòu)突觸的電子顯微斷層掃描圖片
N. Holderith PhD 博士生
Laboratory of Cellular Neurophysiology,
Institute of Experimental Medicine
Budapest
PSD95 (SAP90)
PSD95 (突觸后致密區(qū)蛋白 95) 也稱為SAP90 (突觸關(guān)聯(lián)蛋白 90)或者由DLG4基因編碼的Disks large homolog 4 (Statthakis et al., 1997)。
與其鄰近親屬PSD93, SAP102和SAP97,一同屬于MAGUK 蛋白超級(jí)家族,并且共享PDZ, SH3和GUK結(jié)構(gòu)域的特性(Woods and Bryant, 1993) (見圖4)。

圖4:PSD95蛋白的3D結(jié)構(gòu)。基于PyMOL 上對(duì)PDB 1be9的描述。
PSD95和PSD93 是PSD的關(guān)鍵組分(Hunt et al., 1996; Kennedy, 1997),可以形成包含數(shù)百個(gè)拷貝的多聚體支架,聚集神經(jīng)遞質(zhì)受體、離子通道和其他伴隨的信號(hào)蛋白(Dosemeci et al., 2016)。
出于此原因, PSD95是一個(gè)重要的,常用的標(biāo)記蛋白,用于神經(jīng)系統(tǒng)中突觸后端的特定免疫標(biāo)記,包括免疫細(xì)胞化學(xué) (ICC)和免疫組織化學(xué)(IHC)。然而,由于多聚體的,緊湊且致密的結(jié)構(gòu),抗體表位經(jīng)常被巨大的完整IgG抗體分子所掩蓋或由于空間位阻而難以接近。抗原修復(fù)方法或者特殊調(diào)整過的固定實(shí)驗(yàn)方案可以改善結(jié)果,但由于附加的組織處理步驟,對(duì)于其它抗體在多路復(fù)用實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用可能會(huì)是一個(gè)限制。
The PSD95 FluoTag
新的PSD95 FluoTag N3702是一個(gè)單域抗體(sdAb),通常被稱為納米抗體,由我們的合作伙伴公司NanoTag Biotechnologies所研制開發(fā)。這種重組駱駝源抗體僅由羊駝重鏈抗體的一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)組成。只有約僅僅15 kDa,這種FluoTag比傳統(tǒng)的IgG抗體分子大約小10倍。由于非常小的尺寸,即使在標(biāo)準(zhǔn)的4% PFA灌注固定和后固定組織中,這種PSD95 FluoTag也可以穩(wěn)定地訪問其表位。這種組織制備方法由于確保了組織形態(tài)的極佳保存,并與大量可用的研究抗體兼容,所以通常用于振動(dòng)和冷凍切片的免疫組化染色。
此外,在對(duì)人工培養(yǎng)神經(jīng)元細(xì)胞的免疫組化染色中發(fā)現(xiàn),新引入的PSD95 FluoTag在經(jīng)PFA固定的細(xì)胞上表現(xiàn)Z越(圖 2)。
它的單價(jià)結(jié)合特性,即每個(gè)FluoTag與確定數(shù)量的熒光團(tuán)分子結(jié)合,使其成為定量分析的理想試劑。
為了確保Z大范圍的應(yīng)用符合您的需求,我們新的PSD95 FluoTag可與一個(gè)廣泛的熒光分子團(tuán)共軛(見下表)
PSD95 sdAb - FluoTag-X2 - 所有變異型清單
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 | 應(yīng)用類型 | 規(guī)格 |
| N3702-AF568-L | PSD95 sdAb, camelid, monoclonal, FluoTag-X2, AZdye 568 | WB ICC IHC | 200 ul |
| N3702-AF647-L | PSD95 sdAb, camelid, monoclonal, FluoTag-X2, Alexa 647 | ICC IHC | 200 ul |
| N3702-At488-L | PSD95 sdAb, camelid, monoclonal, FluoTag-X2, ATTO 488 | ICC IHC | 200 ul |
參考文獻(xiàn):
Banker et al. 1974: Proteins of the postsynaptic density. PMID: 4419608
Dosemeci et al. 2016: The Postsynaptic Density: There Is More than Meets the Eye. PMID: 27594834
Hunt et al. 1996: PSD-95 is associated with the postsynaptic density and not with the presynaptic membrane at forebrain synapses. PMID: 8778289
Kennedy 1997: The postsynaptic density at glutamatergic synapses. PMID: 9185308
Meyer et al. 2014: Balance and stability of synaptic structures during synaptic plasticity. PMID: 24742464
Statthakis et al. 1997: Human postsynaptic density-95 (PSD95): location of the gene (DLG4) and possible function in nonneural as well as in neural tissues. PMID: 9286702
Vyas and Montgomery 2016: The role of postsynaptic density in neural degeneration and regeneration. PMID: 27482211
Woods and Bryant 1993: ZO-1, DlgA and PSD-95/SAP90: homologous proteins in tight, septate and synaptic cell junctions. PMID: 8155583
Ziff 1997: Enlightening the postsynaptic density. PMID: 9427241
Synaptic Systems(SySy)品牌成立于德國,專注于研發(fā)和生產(chǎn)針對(duì)突觸和神經(jīng)科學(xué)相關(guān)抗體,以及用于細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)和高分辨率顯微鏡的各種抗體,除此之外,還推出與SySy抗體配套使用的試劑盒、試劑等產(chǎn)品組合,全方面滿足客戶的各種需求。抗體產(chǎn)品線主要有:突觸活性區(qū)域相關(guān)抗體、突觸后蛋白相關(guān)抗體、RNA修飾如m6A抗體、突觸粘附蛋白抗體、SNARE相關(guān)抗體、Alzheimer's相關(guān)抗體、細(xì)胞骨架、離子通道相關(guān)抗體等。該品牌產(chǎn)品專業(yè)且質(zhì)量好,在國內(nèi)外備受好評(píng)。作為SySy在中國的區(qū)域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的SySy產(chǎn)品。
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