AAT Bioquest-PowerStyramide信號放大（PSA）是一種新型酶促放大技術(shù)，用于檢測細(xì)胞和組織中的低豐度靶標(biāo)。該技術(shù)將iFluor染料卓越的亮度與光穩(wěn)定性，與多聚HRP介導(dǎo)的Styramide放大系統(tǒng)相結(jié)合，產(chǎn)生的熒光信號在精度和靈敏度上均顯著優(yōu)于傳統(tǒng)免疫組化、免疫細(xì)胞化學(xué)及原位雜交技術(shù)（提升超100倍）。艾美捷作為AAT Bioquest中國區(qū)代理商，分析一下其技術(shù)優(yōu)勢和多重分析應(yīng)用：

技術(shù)原理

PSA技術(shù)與酪酰胺信號放大（TSA）類似，均利用辣根過氧化物酶（HRP）作為報(bào)告酶，催化標(biāo)記Styramide底物在靶蛋白或核酸序列原位的共價(jià)沉積。在過氧化氫存在下，HRP將標(biāo)記Styramide轉(zhuǎn)化為高反應(yīng)性、短壽命的自由基，這些自由基可快速與酶位點(diǎn)及其鄰近的酪氨酸殘基結(jié)合。Styramide自由基的反應(yīng)活性顯著高于酪酰胺自由基，使得PSA成像較傳統(tǒng)TSA標(biāo)記更快、更穩(wěn)定且更靈敏。由于標(biāo)記Styramide集中沉積在HRP靶點(diǎn)周圍，有效避免了擴(kuò)散導(dǎo)致的分辨率損失。該技術(shù)可靈活應(yīng)用于任何可整合HRP的實(shí)驗(yàn)方案，包括IHC、ICC、IF、原位雜交及ELISA等。

圖：PSA檢測方法在靶抗原免疫標(biāo)記中的示意圖：通過傳統(tǒng)檢測方法，使用未標(biāo)記一抗與HRP標(biāo)記二抗處理細(xì)胞或組織樣本；HRP催化標(biāo)記Styramide轉(zhuǎn)化為高反應(yīng)性自由基，并共價(jià)結(jié)合于酶位點(diǎn)及鄰近酪氨酸殘基。

技術(shù)優(yōu)勢

PSA成像系統(tǒng)通過每個(gè)HRP標(biāo)記快速催化并共價(jià)沉積多個(gè)Styramide底物，實(shí)現(xiàn)信號放大，具有以下顯著優(yōu)勢：

-超敏檢測：對低豐度靶標(biāo)的檢測靈敏度較傳統(tǒng)IHC/ICC/IF方法提升超100倍

-高強(qiáng)度信號：熒光強(qiáng)度達(dá)到酪酰胺信號的10-50倍

-多重兼容性：可與其他熒光標(biāo)記物、染色技術(shù)及PSA成像試劑盒聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)多重分析

-高效反應(yīng)：PSA自由基更高反應(yīng)活性，可在保證靈敏度與分辨率的同時(shí)加速實(shí)驗(yàn)進(jìn)程

-抗體節(jié)約：顯著降低一抗用量即可達(dá)到同等檢測靈敏度

-操作便捷：試劑盒提供100次測試用量，無需復(fù)雜操作流程

靈敏度提升實(shí)踐

在免疫染色應(yīng)用中，PSA成像技術(shù)允許在保持檢測靈敏度的前提下顯著提高一抗稀釋倍數(shù)。這不僅降低了非特異性背景信號，還能克服因固定效果不佳或靶標(biāo)表達(dá)量過低導(dǎo)致的標(biāo)記不充分問題。

多重分析應(yīng)用

PSA系統(tǒng)專為多重檢測設(shè)計(jì)，可與其他熒光標(biāo)記物、細(xì)胞組織染色技術(shù)及其他PSA成像試劑盒兼容，實(shí)現(xiàn)多靶標(biāo)同步可視化。相較于TSA和熒光二抗，PSA更低的檢測閾值使得即使使用同一宿來源的兩種一抗，也能在避免信號串?dāng)_的前提下實(shí)現(xiàn)雙靶標(biāo)檢測。其兼容范圍包括：

-熒光標(biāo)記物與復(fù)染劑（如DAPI,Hoechst）

-熒光蛋白（如GFP,YFP,RFP）

-其他Styramide試劑與PSA成像試劑盒

-酪酰胺試劑及其成像試劑盒

靈活的工作流程適配性

PSA成像技術(shù)可適配任何支持HRP整合的實(shí)驗(yàn)方案，并與免疫應(yīng)用中常見的樣本類型及熒光成像平臺(tái)兼容。當(dāng)與傳統(tǒng)IHC、ICC、原位雜交及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合時(shí)，可在不損失圖像分辨率或不增加背景噪聲的前提下顯著提升檢測靈敏度。

PSA標(biāo)準(zhǔn)操作流程

1.樣本預(yù)處理：對細(xì)胞或組織樣本進(jìn)行固定、透化及封閉處理

2.一抗孵育：與未標(biāo)記一抗、生物素化一抗或生物素化核酸探解育

3.HRP標(biāo)記：加入HRP標(biāo)記二抗或HRP-鏈霉親和素復(fù)合物

4.信號放大：加入iFluor?染料標(biāo)記Styramide工作液，進(jìn)行HRP催化沉積

5.信號檢測：封片后通過相應(yīng)成像系統(tǒng)進(jìn)行信號采集

該技術(shù)通過優(yōu)化信號放大機(jī)制，為生命科學(xué)研究提供了更高效、更精準(zhǔn)的低豐度靶標(biāo)檢測解決方案。

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