你想驗證miRNA對靶基因的影響嗎?——雙熒光素酶報告基因測定

你想了解miRNA和lncRNA/circRNA之間的靶向相互作用嗎?——雙熒光素酶報告基因測定

你想知道下游基因的轉(zhuǎn)錄因子是什么嗎?——雙熒光素酶報告基因測定  

是的，雙熒光素酶系統(tǒng)是如此強大! 

雙熒光素酶（Dual-Luciferase）報告基因系統(tǒng)是一種常用的生物學(xué)實驗技術(shù)，用于研究基因表達(dá)和調(diào)控。雙熒光素酶報告基因通常以螢火蟲熒光素酶（Luciferase）為報告基因，海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）為內(nèi)參基因。該報告系統(tǒng)具有檢測速度快、靈敏度高、動態(tài)范圍寬、無細(xì)胞內(nèi)有源干擾等優(yōu)點。廣泛應(yīng)用于基因調(diào)控和非編碼RNA靶向相互作用的研究領(lǐng)域。今天，我們將重點討論這個話題。  

熒光素酶（Luciferase）來自于北美螢火蟲，它能夠催化熒光素底物的氧化反應(yīng)，產(chǎn)生可見光。這種發(fā)光反應(yīng)非常靈敏和特異，使得熒光素酶成為研究基因表達(dá)和調(diào)控的理想工具。通過將熒光素酶基因與感興趣的基因啟動子或調(diào)控序列連接，可以構(gòu)建熒光素酶報告基因，用于研究基因的轉(zhuǎn)錄活性和調(diào)控機制。

另一方面，海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）是一種海洋生物海腎中發(fā)現(xiàn)的發(fā)光酶，其發(fā)光機制與螢火蟲熒光素酶不同。海腎熒光素酶熒光素酶（Renilla Luciferase）可以被共同底物，底物共軛的熒光素底物所催化，產(chǎn)生另一種發(fā)光。通過將海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）基因與內(nèi)部對照序列連接，可以構(gòu)建報告基因，用于對實驗條件的標(biāo)準(zhǔn)化和校正。  

雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)利用雙熒光素酶同時進行檢測，可以實現(xiàn)基因表達(dá)的定量和標(biāo)準(zhǔn)化。通過測量兩種發(fā)光信號的強度比例，可以減少實驗誤差和干擾，提高結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。這種系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于基因調(diào)控研究、藥物篩選、信號通路分析等領(lǐng)域。 

EZMeta? 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒提供了一種簡單、靈敏、快速的 檢測方法，產(chǎn)品基本信息如下。  

【產(chǎn)品基本信息】

貨號：D-AKC8010 

規(guī)格：100T / 1000T 

適用樣本：細(xì)胞、原生質(zhì)體、植物葉片 

儲存：-20℃保存12個月

【產(chǎn)品基本原理】

在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）可以催化螢火蟲熒光素（Luciferin）生成氧化熒光素（Oxyluciferin），在熒光素被氧化的過程中，會產(chǎn)生光信號。在氧氣存在的條件下，海腎熒光素酶（Renilla luciferase）可以催化腔腸素（Coelenterazine）氧化成腸酰胺（Coelenteramide），在腔腸素氧化的過程中也會產(chǎn)生光信號。通過熒光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達(dá)。 

通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5'-啟動子區(qū)克隆在 Luciferase 的上游，或把 3'-UTR 區(qū)克隆在 Luciferase 的下游，構(gòu)建成報告基因（Reporter gene）質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，通過檢測熒光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎熒光素酶更多地被用作檢測轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒先以螢火蟲熒光素為底物檢測螢火蟲熒光素酶活性，然后加入抑制螢火蟲熒光素酶催化的物質(zhì)，同時加入腔腸素檢測海腎熒光素酶活性，實現(xiàn)雙熒光素酶報告基因檢測。該試劑盒具有檢測迅速、靈敏度高、檢測范圍廣，無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點。  

【產(chǎn)品注意事項】

1. 由于溫度對酶反應(yīng)有影響，所以測定時，樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進行檢測。

2. 為取得合適的測定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測定時，每個樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應(yīng)盡量控制一致；使用具有化學(xué)發(fā)光測定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入。

3. 檢測時需使用全黑色或白色的 96 孔板，防止相鄰孔的干擾。

4. 螢火蟲熒光素酶催化的生物發(fā)光的zui強波長為 560 nm，海腎熒光素酶催化的生物發(fā)光的zui強波長為 480 nm。

5. Renilla Luciferase Substrate 易揮發(fā)，注意密封保存。

【相關(guān)產(chǎn)品推薦】

總之，雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)的起源于螢火蟲和海腎中的發(fā)光酶，并且在基因表達(dá)和調(diào)控研究中發(fā)揮著重要作用。它提供了一種靈敏、可靠和高通量的方法，用于研究基因的轉(zhuǎn)錄活性和調(diào)控機制。   

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