胰腺導(dǎo)管腺癌（PDAC）是一種極具侵襲性的癌癥，5年生存率僅為約11%。其預(yù)后差的主要原因是晚期診斷和有限的治療選擇。

盡管免疫檢查點(diǎn)阻斷（ICB）等免疫療法在多種癌癥中提高了患者生存率，但在PDAC中效果不佳，主要由于低突變負(fù)荷和多種免疫抑制機(jī)制。

CAF是PDAC腫瘤微環(huán)境（TME）中的關(guān)鍵成分，占總腫瘤質(zhì)量的比例高達(dá)80%，并富含細(xì)胞外基質(zhì)和特殊結(jié)締組織細(xì)胞。CAF通過(guò)分泌多種因子和細(xì)胞間相互作用，對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生顯著影響。 唾液酸是一種糖鏈修飾，通過(guò)Siglec受體在免疫細(xì)胞上發(fā)揮免疫檢查點(diǎn)作用。唾液酸的過(guò)表達(dá)與多種癌癥的免疫逃避相關(guān)。

Kelly等人就CAF通過(guò)唾液酸-Siglec相互作用調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞分化的機(jī)制發(fā)表了在線研究《Pancreatic cancer-associated fibroblasts modulate macrophage differentiation via sialic acid-Siglec interactions》

方法

實(shí)驗(yàn)材料與方法

細(xì)胞系：文章使用了多種CAF細(xì)胞系（如M1CAF、T1CAF、PS-1CAF）和腫瘤細(xì)胞系（如BxPC3、MiaPaca-2）。

免疫組織化學(xué)（IHC）：利用Lectenz品牌的唾液酸特異性探針（pan-Lectenz）對(duì)PDAC患者組織樣本進(jìn)行染色，以檢測(cè)唾液酸表達(dá)。

流式細(xì)胞術(shù)：使用Lectenz探針及多種Siglec-Fc融合蛋白，分析CAF細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系上唾液酸的表達(dá)及其與Siglec受體的相互作用。

共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：將CAF細(xì)胞系與單核細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞的分化情況。

基因敲除與抑制實(shí)驗(yàn)：利用CRISPR-Cas9技術(shù)敲除特定基因（如CMAS、ST3GAL4、Siglec-9），或使用唾液酸轉(zhuǎn)移酶抑制劑（SI），研究唾液酸在CAF介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)中的作用。

實(shí)驗(yàn)

唾液酸在CAF中的表達(dá)與功能

組織染色：通過(guò)IHC染色發(fā)現(xiàn)，PDAC組織中CAF區(qū)域的唾液酸表達(dá)顯著高于腫瘤細(xì)胞區(qū)域。

轉(zhuǎn)錄組分析：利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)和單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA-Seq）數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)CAF高表達(dá)與唾液酸合成相關(guān)的基因，特別是ST3GAL4酶。

功能驗(yàn)證：通過(guò)抑制CAF上的唾液酸合成（使用SI或CMAS敲除），發(fā)現(xiàn)唾液酸在CAF介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分化中起關(guān)鍵作用。

CAF與巨噬細(xì)胞的相互作用

共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：CAF細(xì)胞系與單核細(xì)胞共培養(yǎng)后，單核細(xì)胞顯著分化為具有免疫抑制功能的TAM樣巨噬細(xì)胞。

Siglec受體作用：發(fā)現(xiàn)CAF上的唾液酸作為配體，與巨噬細(xì)胞上的Siglec-7、Siglec-9、Siglec-10和Siglec-15受體相互作用，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的免疫抑制分化。

關(guān)鍵酶的作用：通過(guò)敲除CAF中的ST3GAL4酶或巨噬細(xì)胞中的Siglec-9受體，進(jìn)一步驗(yàn)證了唾液酸-Siglec軸在CAF介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分化中的核心作用。

在本研究中，Lectenz的SiaFind廣譜鍵Lectenz檢測(cè)試劑盒起到了關(guān)鍵性作用：

特異性染色：艾美捷SiaFind廣譜鍵Lectenz檢測(cè)試劑盒/SiaFind Pan-Specific Lectenz Kit(SK0501)被用于檢測(cè)PDAC患者組織樣本中的唾液酸表達(dá)，顯示出在CAF區(qū)域的高表達(dá)水平，這為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了關(guān)鍵線索。

流式細(xì)胞術(shù)分析：在流式細(xì)胞術(shù)中，Lectenz探針也被用于檢測(cè)CAF細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系表面唾液酸的表達(dá)情況，以及這些細(xì)胞與Siglec受體的相互作用，為理解CAF的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供了有力工具。