TopoGEN純化的大腸桿菌DNA旋轉(zhuǎn)酶藥物篩選試劑盒旨在篩選新型的回轉(zhuǎn)酶靶向藥物，無(wú)論是作為界面毒物（或誘導(dǎo)DNA切割的IFP）還是催化抑制化合物（通過(guò)多種機(jī)制阻斷回轉(zhuǎn)酶作用的CIC）。它是一種易于采用的直接凝膠分析試劑盒。

DNA超螺旋分析：該藥物篩選試劑盒基于對(duì)提供的松弛質(zhì)粒DNA底物（pHOT1，pBR322的衍生物）和約2.7 KB的回旋酶超螺旋作用。一個(gè)單位的gyrase在37℃下1小時(shí)內(nèi)將超冷200-500ng。該酶通過(guò)符號(hào)反轉(zhuǎn)模型將負(fù)超螺旋引入松弛的pHOT1質(zhì)粒底物中。能量輔因子（ATP）是完成超螺旋反應(yīng)所必需的。非EB凝膠是檢測(cè)旋轉(zhuǎn)酶活性的理想選擇，超螺旋和松弛DNA形式之間的出色分辨率證明了這一點(diǎn)。

藥物篩選試驗(yàn)。該試劑盒旨在鑒定IFP和CIC（分別為毒物和抑制劑）。典型的IFP（如氟喹諾酮）會(huì)誘導(dǎo)雙鏈DNA斷裂，而原型CIC只會(huì)阻止enyzme作用于松弛的DNA（如新生霉素、一些嵌入劑）。因此，IFP（環(huán)丙沙星）將導(dǎo)致線性DNA產(chǎn)物的形成，而CIC將阻斷超螺旋活性。使用此套件可以很容易地檢測(cè)到這些事件。

艾美捷純化的大腸桿菌DNA旋轉(zhuǎn)酶藥物篩選試劑盒：

SKU：TG2001GKIT  

類(lèi)別：藥物篩查試劑盒

標(biāo)簽：DNA旋轉(zhuǎn)酶，藥物篩選，EC DNA旋轉(zhuǎn)酶

純化的大腸桿菌DNA旋轉(zhuǎn)酶藥物篩選試劑盒包含了純化的細(xì)菌（大腸桿菌）DNA旋轉(zhuǎn)酶，純度達(dá)到均一性（基于SDS-PAGE的測(cè)定結(jié)果超過(guò)98%）。旋轉(zhuǎn)酶是從過(guò)表達(dá)菌株中制備的，并以A2B2復(fù)合體形式提供的純化完整酶。酶的單位濃度根據(jù)試劑盒附帶的質(zhì)量控制數(shù)據(jù)提供。它還儲(chǔ)存在穩(wěn)定化緩沖液中[50 mM Tris-Cl pH 7.5，100 mM KCl，2 mM二硫蘇糖醇，1 mM EDTA，50%甘油]。包括底物解鏈DNA（質(zhì)粒pHOT1）。

EC DNA旋轉(zhuǎn)酶測(cè)定藥物試劑盒內(nèi)容（100次測(cè)定）：

1. 解鏈pHOT1 DNA（50微克）

2. 超螺旋pHOT1 DNA（25微升，含凝膠上樣緩沖液）

3. 線性化pHOT1 DNA（25微升，含凝膠上樣緩沖液）

4. 5倍旋轉(zhuǎn)酶測(cè)定緩沖液（0.6毫升）

5. 稀釋緩沖液（0.6毫升）

6. 10倍凝膠上樣緩沖液（0.3毫升）

7. 10倍蛋白酶K（0.5毫升）

8. 10% SDS（0.3毫升）。

9. 純化DNA旋轉(zhuǎn)酶（100單位）

10. 環(huán)丙沙星10微克/毫升（50微升）

DNA旋轉(zhuǎn)酶質(zhì)量控制：

對(duì)我們純化的酶進(jìn)行QC測(cè)試：

1. 通過(guò)測(cè)定線性質(zhì)粒DNA和線性pUC19 DNA的形成來(lái)進(jìn)行核酸酶污染測(cè)試。在10 mM MgCl2存在下，對(duì)1微克的連接kDNA或超螺旋pUC19 DNA進(jìn)行孵化（37°C下4小時(shí)）。在這些條件下沒(méi)有產(chǎn)生線性DNA或分解產(chǎn)物。

2. A和B亞基純度超過(guò)98%，基于SDS-PAGE，并認(rèn)證為內(nèi)切核酸酶自由。

3. 注意：在高輸入水平的DNA旋轉(zhuǎn)酶下，可能會(huì)因?yàn)樽园l(fā)中止的反應(yīng)而檢測(cè)到少量線性DNA。這很正常，實(shí)際上可以作為線性DNA的內(nèi)部標(biāo)記。