駱駝科VHH抗體（也稱為單域抗體，sdAb或Ablynx的Nanobody）是一種約110個氨基酸長度的肽鏈，包含一個重鏈抗體的一個可變域（一個VHH片段）。與完整抗體一樣，駱駝科VHH抗體能夠特異性結(jié)合到特定抗原上。由于其體積小、生產(chǎn)簡單且親和力高，這種單域抗體在生物技術(shù)和治療研究領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。然而，它們的序列可能會增加在人體中引發(fā)免疫原性和抗藥物抗體（ADA）產(chǎn)生的風(fēng)險，因此，在開發(fā)過程中，sdAbs通常會被進行人源化處理。抗人源化VHH親和樹脂F(xiàn)F是為從常用的蛋白表達系統(tǒng)（如細菌、酵母和哺乳動物細胞）中純化人源化VHH單域抗體而設(shè)計的。細胞裂解液中的VHH單域抗體能夠特異性地結(jié)合到連接在樹脂上的抗人源化VHH單克隆抗體上。通過嚴格的洗滌步驟消除非特異性結(jié)合反應(yīng)，以高回收率洗脫純化的目標蛋白。表1列出了抗人源化VHH親和樹脂F(xiàn)F的主要特性。

作為Abnova全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Abnova熱銷產(chǎn)品抗駱駝刺（人源化VHH）親和樹脂F(xiàn)F。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

需要但未提供的材料：

蒸餾水

微量移液器

微量離心管

渦旋混合器

試劑儲槽

空柱

血清學(xué)移液管（5 mL，10 mL）

細胞裂解緩沖液

蛋白酶抑制劑試劑

緩沖液（表2列出了可用于抗駱駝科VHH親和樹脂F(xiàn)F的必要緩沖液。）

實驗步驟：

樣本準備

為了獲得最佳結(jié)果，請按照以下建議進行樣本準備。

a. 根據(jù)蛋白特性準備樣本，優(yōu)化裂解條件以最小化干擾蛋白結(jié)合的因素（見表3）。

b. 樣本不應(yīng)含有任何不溶性顆粒。在純化前，通過過濾或在4°C下以高速離心10-15分鐘以去除不溶性物質(zhì)。

c. 為防止純化過程中蛋白降解，樣本準備應(yīng)在冰上進行和/或在細胞裂解過程中向樣本中添加蛋白酶抑制劑。

d. 在細胞裂解過程中，添加內(nèi)切核酸酶以減少因染色體DNA或RNA釋放導(dǎo)致的樣本黏度增加。

e. 避免頻繁凍融。將裂解液/樣本分裝并保存于-80°C。

樹脂準備

a. 將空柱放置在穩(wěn)固的支撐上；用TBS沖洗柱子一次。

b. 通過輕柔倒置徹底重懸樹脂，并立即將適當體積的懸浮液加載到柱子上。建議使用寬口徑移液頭以便于樹脂懸浮液的轉(zhuǎn)移。

c. 用TBS洗滌樹脂以平衡樹脂，重復(fù)3次，每次用3倍柱體積的TBS。讓緩沖液通過重力從柱子中排出；不要讓樹脂變干。

結(jié)合步驟

抗人源化VHH親和樹脂F(xiàn)F可以通過不同的方法純化駱駝科VHH單域抗體，包括柱色譜法、批量結(jié)合法以及免疫沉淀（IP）或各種常規(guī)中壓色譜系統(tǒng)（如AKTA純化系統(tǒng)）。如果樣本體積約為50 mL且人源化VHH單域抗體含量少于8 mg，建議使用2-4 mL沉淀樹脂的柱結(jié)合形式。對于較大體積的樣本，建議使用批量結(jié)合形式或AKTA純化系統(tǒng)（見第8節(jié)AKTA純化系統(tǒng)）以實現(xiàn)快速高效的純化。對于體積小且蛋白表達水平低的樣本，使用免疫沉淀法（見第7節(jié)人源化VHH單域抗體的免疫沉淀）。

產(chǎn)品圖片：

純化

從大腸桿菌裂解液中純化人源化VHH蛋白。泳道：（1）蛋白標記物，（2）全細胞裂解液，（3）流穿液，（4）目標人源化VHH信號域抗體-1（分子量=15 kDa）的洗脫液。

Abnova生產(chǎn)的所有產(chǎn)品，包括重組蛋白和抗體均采用目前國際上最先進的生產(chǎn)和SPF級動物設(shè)施。Abnova引進CFS先進的麥胚無細胞蛋白合成系統(tǒng)及獨有的全自動蛋白純化技術(shù)，向全球蛋白質(zhì)學(xué)客戶提供最高品質(zhì)的重組蛋白產(chǎn)品。Abnova通過與歐洲的分子生物學(xué)實驗室（EMBL，Eurpean Molecular Biology Laboratory）共同開發(fā)的單克隆抗體生產(chǎn)系統(tǒng)，包括高通量的抗原準備、多位點免疫、自動融合與篩選分析。其中MaxPab技術(shù)是Abnova專利的能雙重識別平面線性蛋白及三維空間結(jié)構(gòu)上接近的蛋白的抗體技術(shù)，非常適合用于免疫學(xué)檢測，MaxPab抗體以真核表達的全長蛋白作為免疫原，制備純化而來，具有非常高的免疫識別功能，同時后繼的純化技術(shù)也保證了極高的特異性，非常適合免疫學(xué)檢測。