背景：

泛素是一種小的多肽，可以通過(guò)其C-末端與靶蛋白上賴氨酸殘基的胺基團(tuán)結(jié)合。這種結(jié)合稱為單泛素化。額外的泛素基團(tuán)可以通過(guò)七個(gè)存在于泛素中的賴氨酸殘基（K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63）之一與初始泛素結(jié)合。當(dāng)泛素附加到第二個(gè)泛素的N-末端時(shí)，形成的鏈被稱為Met1-連接（M1）鏈或“線性”鏈。這些泛素鏈的形成被稱為多泛素化。其中兩種極為典型的形式是K48和K63多泛素化。多泛素化的極為主要結(jié)果是靶蛋白通過(guò)蛋白酶體介導(dǎo)的降解。多泛素化是一個(gè)可逆的過(guò)程，因?yàn)檫@些鏈可以被稱為去泛素化酶（DUBs）的蛋白酶降解和/或去除。這種信號(hào)的動(dòng)態(tài)性質(zhì)是難以隔離和功能表征多泛素化蛋白質(zhì)的主要障礙。因此，許多蛋白質(zhì)的泛素化狀態(tài)是未知或了解有限的。

確定目標(biāo)蛋白上的多泛素鏈連接方式是具有挑戰(zhàn)性的。傳統(tǒng)的方法要么是通過(guò)質(zhì)譜分析，要么是通過(guò)使用特異性連接抗體進(jìn)行免疫印跡，這些方法都比較繁瑣。為了更為明確的證明蛋白質(zhì)的泛素化連接方式，LifeSensors開(kāi)發(fā)研究推出了瓊脂糖-TUBE洗脫試劑盒，利用這個(gè)試劑盒，可以在免疫印跡分析之前，將多泛素化蛋白質(zhì)的免疫沉淀與特異性連接去泛素化酶消化耦合。在K48/K63特異性DUB處理后，未修飾底物的信號(hào)增加或高分子量多泛素化底物的信號(hào)減弱，清晰地表明蛋白質(zhì)經(jīng)歷了K48/K63泛素化。

瓊脂糖-TUBE洗脫試劑盒，使用了能夠結(jié)合所有泛素鏈連接的TUBEs。TUBEs是工程化的串聯(lián)UBA，與四泛素結(jié)合的解離常數(shù)在納摩爾范圍內(nèi)，已經(jīng)證明TUBEs還可以保護(hù)蛋白質(zhì)免受去泛素化和蛋白酶體介導(dǎo)的降解的影響，即使在通常需要抑制這些活性的抑制劑缺失的情況下。TUBEs對(duì)多泛素化蛋白質(zhì)的納摩爾親和力使得從細(xì)胞系和組織中高效地分離和表征這些蛋白質(zhì)成為可能。已經(jīng)證明TUBE1能夠結(jié)合所有8種連接類型。TUBEs的出色特性使其能夠高效地檢測(cè)多泛素化蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)，而TUBEs的多功能性則滿足了廣泛的實(shí)驗(yàn)需求。瓊脂糖-TUBEs是將TUBE結(jié)構(gòu)直接耦合到瓊脂糖珠上，用于通過(guò)免疫印跡和/或下游蛋白質(zhì)組學(xué)研究來(lái)鑒定和表征多泛素化蛋白質(zhì)。瓊脂糖-TUBEs能夠方便地進(jìn)行“一步式”下拉（pull-down）多泛素化蛋白質(zhì)的操作。

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應(yīng)用領(lǐng)域

1. 從細(xì)胞和組織提取物中方便地一步式下拉（pull down）多泛素化蛋白質(zhì)

2. 分離泛素化蛋白質(zhì)以進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究

3. 確認(rèn)目標(biāo)蛋白質(zhì)的泛素化連接方式

優(yōu)勢(shì)

? 與單個(gè)UBA相比，對(duì)多泛素鏈的親和力高出1000倍

? 避免過(guò)度表達(dá)表位標(biāo)記的泛素用于下拉實(shí)驗(yàn)

? 明確確定目標(biāo)蛋白質(zhì)的泛素化狀態(tài)

? 可以在單個(gè)樣品中多重復(fù)合，檢測(cè)多個(gè)不同的目標(biāo)

結(jié)果分析

 對(duì)Jurkat細(xì)胞中的蛋白質(zhì)進(jìn)行泛素化連接分析。

（A）廣譜DUB處理后MDM2信號(hào)增加，表明MDM2被多泛素化。在K48特異性DUB處理后，免疫印跡中MDM2信號(hào)增加，表明MDM2被K48泛素化。MDM2信號(hào)在免疫印跡中較高，是因?yàn)镈UB未水解目標(biāo)蛋白質(zhì)上的近端Ub，或者存在與K48鏈不同的多泛素鏈連接。

（B）廣譜DUB處理后未修飾的TNFR1信號(hào)增加，表明TNFR1被多泛素化。在K63特異性DUB處理后，高分子量泛素化的TNFR1信號(hào)減少，未修飾的TNFR1信號(hào)增加，表明TNFR1被K63泛素化。

LifeSensors成立于1996年，位于美國(guó)賓夕法尼亞州費(fèi)城，是一家為藥物發(fā)現(xiàn)與研究提供方法和可行性技術(shù)方法的生物技術(shù)公司，目前主要的產(chǎn)品有400多種，其產(chǎn)品主要覆蓋泛素和泛素蛋白酶體通路等科學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域，并且公司擁有兩大獨(dú)家技術(shù)平臺(tái)：用于細(xì)胞信號(hào)和藥物發(fā)現(xiàn)的泛素蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)，以及增強(qiáng)目的蛋白在大腸桿菌、酵母、昆蟲(chóng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)與純化的SUMO融合表達(dá)系統(tǒng)，此外，LifeSensors還為泛素的蛋白質(zhì)組學(xué)提供眾多定制技術(shù)服務(wù)，并且已經(jīng)開(kāi)發(fā)了各種各樣的測(cè)定細(xì)胞中的生理底物或生物標(biāo)志物的方法。

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傳統(tǒng)方法繁瑣，而我們的試劑盒結(jié)合TUBEs技術(shù)，清晰展示蛋白質(zhì)的泛素化狀態(tài)。TUBEs高效結(jié)合各種泛素鏈，確保準(zhǔn)確分離和鑒定多泛素化蛋白質(zhì)，滿足廣泛實(shí)驗(yàn)需求。

瓊脂糖-TUBEs直接耦合TUBE結(jié)構(gòu)，簡(jiǎn)便進(jìn)行“一步式”下拉多泛素化蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)。適用于細(xì)胞和組織提取物，幫助分離泛素化蛋白質(zhì)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，確認(rèn)目標(biāo)蛋白質(zhì)的泛素化連接方式。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

對(duì)多泛素鏈的親和力高出1000倍

避免過(guò)度表達(dá)標(biāo)記泛素

明確確定目標(biāo)蛋白質(zhì)的泛素化狀態(tài)

單個(gè)樣品多重復(fù)合，檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)

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