前情回顧：經(jīng)典染料1——熒光素及其衍生物

      上一期我們給大家介紹了經(jīng)典染料中大名鼎鼎的熒光素，今天來帶大家了解一下另一款經(jīng)典染料——香豆素，香豆素和香豆素衍生物是紫外線可激發(fā)的藍色熒光染料，其發(fā)射波長范圍約為390至480nm。用途最廣泛的香豆素包括AMCA，7-氨基香豆素（AFC和AMC），7-羥基香豆素和7-甲氧基香豆素的衍生物， 用于制備藍色熒光肽，蛋白質(zhì)和其他生物分子。與熒光素，羅丹明和花青素相比，香豆素由于其相對較低的消光系數(shù)而產(chǎn)生中等亮度和光穩(wěn)定性的熒光。

      藍色熒光探針最適合用于細胞骨架等高豐度靶標(biāo)的直接成像，細胞追蹤應(yīng)用，檢測酶活性和某些多色熒光應(yīng)用的底物-包括免疫熒光，核酸和蛋白質(zhì)微陣列，原位雜交和神經(jīng)元追蹤。

       光譜性質(zhì)

       表1. 7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AMC）的光譜性質(zhì)。

圖1. AMCA（一種常用的香豆素衍生物）的激發(fā)和發(fā)射光譜。

       iFluor™350-替代物——AMCA和AlexaFluor®350

      iFluor™350染料是一種與AMCA光譜相似的亮藍色熒光染料，具有改善的水溶性，光穩(wěn)定性和更高的熒光量子產(chǎn)率。iFluor™350偶聯(lián)物非常適合于高豐度靶標(biāo)的直接成像，在多色應(yīng)用（例如流式細胞儀和超分辨率熒光顯微鏡）中特別有用，而不會影響綠色和紅色熒光探針的性能。

      圖2.將 HeLa細胞固定在4％甲醛中，然后用Phalloidin iFluor™350偶聯(lián)物和Nuclear Orange™DCS1染色。

       表2. iFluor™350——AMCA和AlexaFluor®350的替代產(chǎn)品

       香豆素相關(guān)產(chǎn)品

      我們提供多種香豆素相關(guān)產(chǎn)品，包括用于標(biāo)記肽，蛋白質(zhì)和其他生物分子的活性染料，綴合物，指示劑和用于檢測細胞，勻漿和溶液中酶活性的底物。

       1. 參考標(biāo)準(zhǔn)：

      7-羥基-4-甲基香豆素（4-甲基傘形酮）（Cat# 41）

      7-羥基-4-三氟甲基香豆素（Cat# 82）

      3-氰基-7-羥基香豆素（Cat# 40）

      6-氯-8-氟傘形酮（CF-MU）（Cat# 42）

       2. 前體

      7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC）（Cat# 56）

      7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）（Cat# 51）

      2,4-二氟間苯二酚（Cat# 4023）

      4-氟間苯二酚（Cat# 4022）

       3. 反應(yīng)性香豆素染料

       反應(yīng)性熒光香豆素和香豆素衍生物廣泛用于共價標(biāo)記生物分子，例如抗體，碳水化合物，核酸，蛋白質(zhì)，肽和寡核苷酸。香豆素共軛物可產(chǎn)生適度明亮和光穩(wěn)定的藍色熒光，當(dāng)與綠色，黃色或紅色熒光探針結(jié)合使用時，通常用作檢測酶活性或在彩色熒光研究中提供對比的底物。香豆素和香豆素衍生物很容易在各種染料標(biāo)記化學(xué)中獲得，包括：

      琥珀酰亞胺酯/ NHS酯-用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)，肽，胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離胺（-NH？）

      馬來酰亞胺-用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)和肽上的巰基

      疊氮化物-通過點擊化學(xué)法標(biāo)記亞乙基

      炔烴-通過點擊化學(xué)法標(biāo)記疊氮化物

      酰肼-用于標(biāo)記醛基和酮基

      羧酸-用碳二亞胺預(yù)活化后標(biāo)記胺，或用于醇類的Steglich酯化

      胺-用于標(biāo)記各種親電子化合物，例如活化的酯

       表3. 可用的反應(yīng)性香豆素和香豆素衍生物。

      Note：ε= 在其最大吸收波長處的摩爾消光系數(shù)（單位= cm ^-1 M ^-1）

       4. 香豆素標(biāo)記的酶底物

      香豆素和香豆素衍生物經(jīng)常用于制備熒光底物，以檢測細胞和溶液中的酶活性。當(dāng)被目的酶水解時，香豆素修飾的底物顯示出與酶活性成線性比例的熒光強度增加。AAT Bioquest提供了多種香豆素修飾的底物，可用于檢測Caspase，蛋白酶，肽酶，磷酸酶等的活性。

       表4. 可用香豆素標(biāo)記的熒光底物。

        5. 香豆素標(biāo)記的綴合物

      香豆素標(biāo)記的結(jié)合物因其亮藍色熒光和出色的光穩(wěn)定性而在生物成像和生物標(biāo)記中具有廣泛的應(yīng)用。香豆素衍生物可以標(biāo)記抗體，鏈霉親和素，鬼筆環(huán)肽，膜聯(lián)蛋白v和其他生物分子，以研究細胞凋亡，標(biāo)記細胞器或通過放大微弱信號來提高測定靈敏度。

       表5.可用香豆素標(biāo)記的綴合物。

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