細(xì)胞凋亡（apoptosis）是一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。在正常活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。膜聯(lián)蛋白V(Annexin V) 是一種分子量為35~36KDa的鈣離子依賴型磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。通過(guò)AbFluor^TM 488標(biāo)記Annexin V即可簡(jiǎn)單快速地直接檢測(cè)出細(xì)胞早期凋亡情況（綠色熒光）。

         碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，而早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完好的，對(duì)PI有拒染性。但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染上。

        使用AbFluo™ 488和碘化丙啶（PI）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色可以區(qū)分完整細(xì)胞，早期凋亡和晚期凋亡或壞死細(xì)胞。有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱下面的列表。   

       * PI：Ex/Em = 535/617 nm (DNA)     Abbkine使用卓越的AbFluor™ 染料，針對(duì)Annexin V研發(fā)了多種偶聯(lián)產(chǎn)物。AbFluor™染料與其它熒光標(biāo)記染料相比，如FITC，TRITC，Cy^®染料，AlexaFluor^®和Dylight^®標(biāo)記染料，具有相同或更好的標(biāo)記性能和熒光表現(xiàn)（熒光亮度，耐光性），特別適用于體內(nèi)成像和流式細(xì)胞術(shù)。

        以Annexin V-AbFluor™ 488 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒為例：   

使用喜樹(shù)堿（camptothecin）誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡（24h），使用Annexin V- AbFluor™ 488 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒進(jìn)行染色。圖中展示的是晚期凋亡/壞死細(xì)胞。（綠色為細(xì)胞膜，紅色為細(xì)胞核）
	使用喜樹(shù)堿（camptothecin）誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡（24h）。 使用Annexin V- AbFluor™ 488 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒進(jìn)行染色，可以區(qū)分早期凋亡細(xì)胞 (Annexin V- AbFluor™ 488 陽(yáng)性), 晚期凋亡或壞死細(xì)胞 (Annexin V- AbFluor™ 488 與PI 均為陽(yáng)性), 和活細(xì)胞 (未染色).

•        Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題：

1.        1.Abbkine Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒可以檢測(cè)人類(lèi)以外動(dòng)物的細(xì)胞凋亡嗎？

       答：當(dāng)然。因?yàn)樵噭┖性硎茿nnexin V與磷脂酰絲氨酸（PS）親和，而PS在不同物種之間沒(méi)有差異。   

2.        2.胰酶對(duì)貼壁細(xì)胞的影響？

       答：胰酶對(duì)細(xì)胞膜有一定的損傷，但用低濃度胰酶消化， 輕柔吹打貼壁細(xì)胞 2～ 3 次， 離心機(jī) 4℃， 300g， 5min 離心，處理得當(dāng)?shù)脑挘?胰酶造成的損傷可以控制在 5%以內(nèi)， 有對(duì)照組的情況下對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不會(huì)造成明顯影響。   

3.        3.為什么只能用不含 EDTA 的胰酶消化貼壁細(xì)胞？

       答：Annexin V 是 Ca 依賴性蛋白， 所以不能加入 EDTA， 防止 EDTA 螯合了 Ca 離子從而影響 Annexin V， 進(jìn)而影響結(jié)果。

       About Abbkine Scientific Co., Ltd.

       Abbkine Scientific Co., Ltd.成立于2012年。我們的使命通過(guò)為廣大科學(xué)家提供人類(lèi)和動(dòng)物健康研究所需的基礎(chǔ)研究工具，以期成為研究探索的關(guān)鍵推動(dòng)者。我們將通過(guò)明確的核心戰(zhàn)略和促進(jìn)誠(chéng)信、開(kāi)放、合作、創(chuàng)新和為客戶服務(wù)的企業(yè)文化，為廣大生命科學(xué)研究者提供買(mǎi)得起的高品質(zhì)產(chǎn)品，實(shí)現(xiàn)我們的使命。