做免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常要進(jìn)行免疫熒光的雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，也就是在同一個(gè)樣本上同時(shí)進(jìn)行兩種蛋白的免疫熒光檢測(cè)。具體的實(shí)驗(yàn)時(shí)，可以選擇不同來(lái)源的一抗，然后再選擇分別針對(duì)一抗的二抗，同時(shí)二抗上標(biāo)記有不同的熒光團(tuán)。一般的雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)里，都會(huì)選擇一個(gè)綠色的（如FITC、Cy2、Dylight 488等）熒光標(biāo)記，一個(gè)紅色的（如Rhodamin、Cy3、TRITC、Texas Rad、Dylight 539等）的熒光標(biāo)記。紅綠二色的區(qū)分度很大，效果也比較理想。那么，如果是三標(biāo)呢？請(qǐng)看看下面的一個(gè)圖。

   左側(cè)的一個(gè)免疫熒光圖片就包括了3種顏色，綠色FITC（FITC最大吸收光波長(zhǎng)為490495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)520530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光）和紅色羅丹明Rhodamin（最大吸收光波長(zhǎng)為570nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為595～600nm，呈橘紅色熒光）的熒光均為熒光團(tuán)標(biāo)記的二抗，而第三種顏色則來(lái)自于負(fù)染細(xì)胞核的藍(lán)色DAPI染料（DAPI 的激發(fā)光波長(zhǎng)為358 nm ,發(fā)射光波長(zhǎng)為461 nm ,熒光激發(fā)下發(fā)藍(lán)光，與細(xì)胞核DNA結(jié)合）。一般來(lái)說(shuō)，綠色和紅色熒光重合后顯示的是黃色，而橙色、黃色、紅色的光非常接近，因此三標(biāo)的時(shí)候，一般選擇藍(lán)色熒光。就如左圖所示。

實(shí)際上，上面的示例并不是完全意義上的免疫熒光三標(biāo)，因?yàn)镈API只相當(dāng)于負(fù)染。還有一種情況，需要同時(shí)在一個(gè)樣本里通過(guò)免疫熒光技術(shù)對(duì)三種蛋白進(jìn)行定位，這就需要選擇第三種熒光團(tuán)，而不是DAPI這樣的染料。也即，一個(gè)綠色熒光標(biāo)記的二抗、一個(gè)紅色熒光標(biāo)記的二抗，再加一個(gè)藍(lán)色熒光標(biāo)記的二抗。艾美捷為您提供卓越的藍(lán)色熒光標(biāo)記的抗體產(chǎn)品，比AMCA藍(lán)色熒光具有更高熒光強(qiáng)度、更好光學(xué)穩(wěn)定性和敏感度的Dylight 350藍(lán)色熒光。

右圖所示即為AMCA藍(lán)色熒光與FITC、Cy3等熒光的對(duì)比圖例。AMCA藍(lán)色熒光團(tuán)的吸收光波長(zhǎng)最大為350nm，發(fā)射熒光則為450nm。對(duì)于熒光顯微鏡來(lái)說(shuō)，AMCA可以用汞燈來(lái)激發(fā)，用紫外濾板來(lái)觀察。由于AMCA的信號(hào)相對(duì)較弱，單標(biāo)實(shí)驗(yàn)中不推薦使用AMCA。而Dylight 350和Dylight 405作為Dylight系列熒光團(tuán)中AMCA的卓越替代品，具有很多優(yōu)勢(shì)，包括更高的熒光強(qiáng)度、更好的光學(xué)穩(wěn)定性和特異性、水溶性更好從而背景更低、更高的性價(jià)比等。具體見(jiàn)熒光二抗的選擇——Dylight熒光與傳統(tǒng)熒光標(biāo)記的比較。Abbkine的部分Dylight 350和Dylight 405熒光抗體產(chǎn)品如下：

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