還在做漫長的透析，調(diào)pH...想要表達生產(chǎn)點GST融合蛋白，怎么就這么難？

眾所周知，GST標簽是由211個氨基酸組成，大小約為26KDa，作為一種高度可溶的蛋白，能增加外源蛋白的可溶性，提高表達量，而被廣泛應(yīng)用于重組蛋白表達以及親和純化實驗中。盡管有這些優(yōu)點，但GST標簽融合蛋白依舊無法避開包涵體的噩夢！

Fig.1 常規(guī)包涵體蛋白復(fù)性過程

如何擊破GST融合蛋白包涵體的問題，目前常規(guī)的的常規(guī)流程是：收菌破碎--洗滌--變性溶解（尿素等）--復(fù)性。而復(fù)性板塊中的稀釋和透析不僅慢，而且無法滿足大規(guī)模的蛋白生產(chǎn)需求。

作為專業(yè)的生命科學(xué)醫(yī)藥原料供應(yīng)商，艾美捷科技為您推薦：專為GST融合蛋白高效高溶解性而設(shè)計的產(chǎn)品，GST包涵體快速溶解與復(fù)性試劑盒！

快速GST包涵體增溶和復(fù)性試劑盒旨在在裂解和提取程序后以可溶性形式回收表達的GST融合蛋白。 每個試劑盒均包含足以溶解和復(fù)性多達5-10L細菌培養(yǎng)物的試劑。

*** 該產(chǎn)品僅用于科研實驗.

• GST包涵體快速溶解與復(fù)性試劑盒的優(yōu)勢：

1.專為GST包涵體設(shè)計和優(yōu)化

2.節(jié)省時間：無需冗長的透析或稀釋步驟，僅需2h

3.使用便捷：不涉及pH值變化和氧化還原

4.大規(guī)模生產(chǎn)：每個Kit滿足5-10 L的細菌培養(yǎng)液

Fig.2 GST包涵體快速溶解與復(fù)性試劑盒-實驗流程

Fig.3 GST包涵體快速溶解與復(fù)性試劑盒-結(jié)果展示

• Cell文章鑒賞：

Campion, Carole G et al. "COMMD5/HCaRG Hooks Endosomes on Cytoskeleton and Coordinates EGFR Trafficking". Cell reports vol. 24,3 (2018): 670-684.e7. doi:10.1016/j.celrep.2018.06.056

【摘要】COMMD5/HCaRG 參與組織修復(fù)，其低表達與致瘤性有關(guān)。細胞生長、遷移和分化由 COMMD5 控制。我們之前報道過 COMMD5 通過調(diào)節(jié) ErbB 成員的表達或磷酸化來抑制腎癌細胞的生長。在這里，我們證明 COMMD5 對細胞骨架的穩(wěn)定性至關(guān)重要。它的沉默導(dǎo)致肌動蛋白和微管網(wǎng)絡(luò)的重大重組。 COMMD5 的 N 末端與內(nèi)體 Rab5 結(jié)合，其 C 末端（包括 COMMD 結(jié)構(gòu)域）與細胞骨架支架結(jié)合。 COMMD5 參與長程內(nèi)體轉(zhuǎn)運，包括表皮生長因子受體 (EGFR) 再循環(huán)，并提供變形的強度并協(xié)助囊泡斷裂成分選內(nèi)體。該研究建立了 COMMD5 作為銜接蛋白協(xié)調(diào)內(nèi)體運輸?shù)姆肿訖C制，并揭示了其在 EGFR 運輸和活性中的重要作用。

已發(fā)表文章：

• Gao, Q. et al. (2019). Purification of insoluble GST-fused and GST-cleaved Cav1.2 channel fragment by denaturation and renaturation. Protein Expr Purif. 160:7-10. doi: 10.1016/j.pep.2019.03.013.

• Campion, C.G. et al. (2018). COMMD5/HCaRG Hooks Endosomes on Cytoskeleton and Coordinates EGFR Trafficking. Cell Rep. 24(3):670-684.e7. doi: 10.1016/j.celrep.2018.06.056.

• Wang, H. et al. (2017). Truncated protein tyrosine phosphatase receptor type O suppresses AKT signaling through IQ motif containing GTPase activating protein 1 and confers sensitivity to bortezomib in multiple myeloma. Oncotarget. 8(69):113858-113873. doi: 10.18632/oncotarget.23017.

• Hamel, V. et al. (2017). Identification of Chlamydomonas Central Core Centriolar Proteins Reveals a Role for Human WDR90 in Ciliogenesis. Curr Biol. 27(16):2486-2498.e6. doi: 10.1016/j.cub.2017.07.011.

• Dixon, J. E. et al. (2016). Highly efficient delivery of functional cargoes by the synergistic effect of GAG binding motifs and cell-penetrating peptides. Proc Natl Acad Sci U S A. 113:E291-E299.

• Matsuoka, T. et al. (2014). Expression and characterization of honeybee, Apis mellifera, larva chymotrypsin-like protease. Apidologie. doi:10.1007/s13592-014-0313-2.

• Keller, D. et al. (2014). Mechanisms of HsSAS-6 assembly promoting centriole formation in human cells. J. Cell Biol. 204:697-712.

• Lalani, S. et al. (2013). MCTP2 is a Dosage-Sensitive Gene Required for Cardiac Outflow Tract Development. Hum. Mol. Genet. 10.1093/hmg/ddt283.

• Sabbah, M. et al. (2011). CCN5, A Novel Transcriptional Repressor of Transforming Growth Factor- Signaling Pathway. Mol. Cell. Biol. 10.1128/MCB.01316-10.

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