在免疫熒光（Immunofluorescence，IF）實驗中，通常會在同一組織細胞標本上同時檢測兩種抗原，因而進行雙重熒光染色（直接法和間接法）。一般來說，直接法簡便可靠，但靈敏度較低，而且抗體來源較少；因此，大部分人會選擇間接免疫熒光法：先用兩種不同種屬來源的特異性一抗孵育，再用對應的不同熒光素標記的二抗孵育，從而在熒光顯微鏡下觀測。

在免疫熒光實驗中，有時候也需要同時對兩個或多個目標蛋白進行共定位。此時，可以選擇兩個帶有不同熒光顏色標記的一抗；然而，在更多的情況下，需要通過兩到三種不同種屬來源的未標記一抗，再配合兩到三種帶不同熒光標記的二抗以實現IF 雙標或三標。那么該如何選擇合適的免疫雙標/多標實驗的二抗？ 

首先需要考慮熒光顏色的選擇

紅色和綠色是最常見的兩種熒光選擇，綠色如FITC、Cy2或新一代Dylight 488等熒光染料；橙色如TRITC、Cy3 等熒光染料，而Texas Red則顯示紅色，Cy5、Cy7、APC或新一代熒光染料Dylight 649等則提供了深紅色顯示方案。目前IF雙標一般優(yōu)先選擇紅色和綠色；如果是三標，則第三種顏色選擇藍色，如AMCA 或者新一代Dylight 350、Dylight 405等。IFkine®系列熒光二抗來自于最新一代的熒光標記基團，在熒光強度、信噪比以及熒光的耐淬滅性上遠遠由于通用的FITC、TRITC、羅丹明等常規(guī)熒光基團的優(yōu)勢，同時具有接近或優(yōu)于第二代熒光染料Alexa Flour和Dylight的熒光表現。其IFkine® Green提供綠色標記方案，IFkine® Green則是Cy3和羅丹明的卓越替代物，IFkine® Red則為Texas Red提供更優(yōu)越的紅色熒光方案。該系列熒光團具有更高的熒光強度、更低的背景、更佳的抗淬滅性以及優(yōu)異的性價比。

另外二抗的類型對IF雙標/多標也有莫大的影響

在免疫熒光雙標或多標時，首先樣本本身的復雜條件可能會產生與二抗的非特異性雜交；另外，由于同時有兩個一抗分子，因此一抗與二抗之間也有一定的非特異性結合。IFkine®系列熒光二抗經過特別優(yōu)化，其針對目的種屬的特異性非常高，同時針對其他非目的種屬的抗體分子的非特異性結合降到最低，同時避免了二抗與樣本以及其它一抗的非特異性雜交。

在二抗的種屬來源角度，因為需要考慮一抗的不同種屬來源，以及免疫熒光封閉血清的選擇。二抗的種屬與一抗的種屬最好有所區(qū)別，同時考慮到血清的種屬來源要與二抗一致，所以最優(yōu)的情況是，IF多標實驗中二抗的種屬來源于非小鼠、非兔、非山羊，而是選擇驢、馬、雞等種屬來源，并且二抗采用一樣的種屬來源，這樣可以一種來源的血清完成兩個抗體的封閉。IFkine®系列熒光二抗均來源于驢，可以配合驢血清進行封閉，效果非常好，在免疫熒光雙標以及多標實驗中有更出眾的表現。IFKine^®系列熒光（IFKine Green、IFKine Orange和IFKine Red）的激發(fā)光譜：

作為獨特的系列新型熒光抗體產品，IFKine^®具有市場上最高的熒光染色亮度和耐光性，并兼具較少的非特異性雜交和背景，非常適合作為免疫熒光和流式細胞術實驗。驢來源二抗以確保在多標使用中的通用型，并且經過特殊處理，其與其它種屬來源的蛋白樣本或抗體幾乎沒有交叉反應，因此其在免疫熒光分析的雙標以及多標實驗中有更出眾的表現。我們向您推薦美國Abbkine原裝進口的液體形式的小包裝IFKine^®系列熒光專用二抗產品，目前推出的產品主要是：

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