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有效高通量篩選赤潮藻類中的細菌代謝產(chǎn)物,大腸桿菌K-12 Keio

發(fā)布者:艾美捷科技    發(fā)布時間:2021-01-14     
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       水生生物是大型生態(tài)網(wǎng)絡(luò)的一部分,許多生物在整個生命周期中都通過這種網(wǎng)絡(luò)相互影響。近幾十年來,對藻類和細菌之間不同類型的生態(tài)相互作用(包括共生和共生)進行了大量研究,試圖闡明這些相互作用的潛在工業(yè)應(yīng)用。這些研究表明,特定細菌可以改變藻類的生長反應(yīng)和生理機制,這些現(xiàn)象導(dǎo)致了有趣的工業(yè)利益,例如藻類的絮凝和油脂積聚,以及提高了生物量的生產(chǎn)率。先前對細菌與微藻相互作用的研究表明,藻類的生長反應(yīng)可以被各種細菌代謝物改變,例如吲哚-3-乙酸,維生素B12和細菌鐵載體。這些研究表明細菌代謝產(chǎn)物是藻類種群和生理的主要調(diào)節(jié)劑。

       對細菌代謝產(chǎn)物及其生態(tài)影響的研究不僅為其工業(yè)用途及其生態(tài)學(xué)研究提供有用的信息,而且還為控制水生環(huán)境中有害藻華(赤潮,HABs)提供了信息。近年來,氣候變化加劇了HABs的發(fā)生,這已成為一個主要的生態(tài)問題。有害生物有害生物不僅嚴(yán)重破壞水生生態(tài)系統(tǒng),而且對漁業(yè)產(chǎn)生不利影響,并可能通過生物蓄積或生物放大作用損害人類健康。已經(jīng)提出了幾種控制HAB的策略,包括化學(xué)處理-使用高錳酸鉀和硫酸銅,以及使用泵,屏障和過濾器進行機械控制。生物治療方法是使用生物體(如殺藻細菌和病毒)控制HAB的另一種策略。對于采用生物學(xué)方法,至關(guān)重要的是表征細菌相互作用的代謝產(chǎn)物,以評估可能的環(huán)境風(fēng)險和機理反應(yīng)。

      為了鑒定細菌相互作用的代謝產(chǎn)物,Hee-Sik Kim團隊使用大腸桿菌K-12突變文庫應(yīng)用了高通量篩選方法。Keio集合,包括大腸桿菌K-1228中所有非必需基因的所有單基因敲除突變體。

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      篩選顯示,與野生型大腸桿菌相比,大腸桿菌K-12中共有80個基因敲除突變體,導(dǎo)致藻類生長增加了約1.5倍。從篩選中鑒定了參與脂多糖(LPS)(或脂寡糖,LOS)生物合成的五個細菌基因(lpxL,lpxM,kdsC,kdsD,gmhB)。與野生型相比,在這些細菌中檢測到的LPS水平相對較低。此外,合成LPS補充后微藻生長的濃度依賴性降低表明LPS抑制藻類生長。LPS的添加以濃度依賴性方式增加了2,7-二氯二氫熒光素二乙酸酯的熒光以及脂質(zhì)過氧化介導(dǎo)的丙二醛形成的水平,表明氧化應(yīng)激可能源于LPS的添加。此外,補充LPS還顯著降低了多種形成花白藻的鞭毛藻和綠藻的生長。研究結(jié)果表明,基于Keio集合的高通量體外篩選是鑒定交互式細菌代謝產(chǎn)物和相關(guān)基因的有效方法。

      【文章來源】doi.org/10.1038/s41598-020-67322-w

      【文章中是如何有效檢測脂多糖(LPS)的含量?】

      作者Hee-Sik Kim團隊,使用了艾美捷代理品牌之一的Abbexa,貨號:abx150357,脂多糖(LPS)ELISA試劑盒。

產(chǎn)品貨號Abx150357
產(chǎn)品名稱Lipopolysaccharides (LPS) ELISA Kit
品牌Abbexa中國區(qū)代理,艾美捷科技
樣品類型血清,血漿,組織勻漿,細胞裂解液,細胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體。
靶標(biāo)脂多糖(LipopolysaccharidesLPS)
種屬特異性通用型試劑盒,無種屬特異性
實驗方法比色法,競爭ELISA
檢測范圍12.35 ng/ml - 1000 ng/ml
實驗原理
該試劑盒基于競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)。 將抗體預(yù)包被到96孔板上。 將標(biāo)準(zhǔn)品,測試樣品和生物素偶聯(lián)試劑添加到孔中并孵育。 競爭抑制反應(yīng)發(fā)生在生物素標(biāo)記的LPS和預(yù)包被抗體上的未標(biāo)記LPS之間。 然后加入結(jié)合了HRP的試劑,并孵育整個平板。 在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的結(jié)合物。 TMB底物用于定量HRP酶促反應(yīng)。 添加TMB底物后,只有含有足夠LPS的孔才會產(chǎn)生藍色產(chǎn)物,然后在加入酸性終止液后變?yōu)辄S色。 黃色的強度與印版上的LPS量成反比。 在酶標(biāo)儀中于450 nm處用分光光度法測量OD,由此可計算出LPS的濃度。
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      作為一家具有高端的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè),總部位于武漢光谷高新技術(shù)開發(fā)區(qū),服務(wù)面向全國。艾美捷科技是集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案,及優(yōu)質(zhì)的物流服務(wù)。為了更好的服務(wù)客戶,公司組建了一支經(jīng)驗豐富的研發(fā)團隊-艾美捷生物技術(shù)中心,進入研發(fā)生產(chǎn)階段,將更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品推薦給國內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁們!

      艾美捷科技與國內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商優(yōu)保持著密切的合作關(guān)系,目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Abbexa、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、GeneCopoeia、Hycult Biotech、ImmunoReagents、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene 、ProSpec、ProImmune、StressMarq、ScyTek 、SouthernBiotech、US Biological、Solis BioDyne等,可以在短時間內(nèi)為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。

 

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