【前情回顧】：

     【1】您不曾了解系列：微管蛋白tubulin染色（活細(xì)胞），點(diǎn)擊了解

     【2】您不曾了解系列2：活細(xì)胞微絲F-actin染色（兼容固定細(xì)胞），點(diǎn)擊了解

     【3】您不曾了解系列3：活細(xì)胞DNA染色，點(diǎn)擊了解

     【4】您不曾了解系列4：活細(xì)胞脂質(zhì)染色，點(diǎn)擊了解

       前期我們給大家推薦了Cytoskeleton的多種活細(xì)胞成像探針，這些革命性的探針簡化了微管（SiR-Tubulin），F(xiàn)-肌動蛋白（SiR-Actin），溶酶體（SiR-Lysosome）和染色體DNA（SiR-DNA）的染色。最初的SiR探針基于專有的熒光團(tuán)若丹明（SiR），將細(xì)胞骨架蛋白，溶酶體和DNA的活細(xì)胞成像引入了一個新的時代。這些具有低背景和低細(xì)胞毒性的熒光，同時具有高亮度且光穩(wěn)定性的探針代表了已經(jīng)使用了數(shù)十年的活細(xì)胞成像探針的重大改進(jìn)。這些革命性的SiR探針具有多種優(yōu)秀性能，并且相對于其他活細(xì)胞成像探針有所改進(jìn)，包括：

      1.細(xì)胞通透性（無需轉(zhuǎn)染）

      2.光穩(wěn)定性

      3.極低的背景

      4.超分辨率顯微鏡兼容性（STED，SIM）

      5.遠(yuǎn)紅外熒光團(tuán)（與Cy5兼容）

      6.無細(xì)胞毒性

      在這里，我們很高興向大家介紹Cytoskeleton的下一代活細(xì)胞成像探針– SPY探針。SPY探針對遠(yuǎn)紅外通道中的SiR和SiR700活細(xì)胞成像探針進(jìn)行了改進(jìn)，同時還擴(kuò)寬了熒光標(biāo)記的選擇范圍，用于研究活細(xì)胞中的F-actin，Tubulin和DNA。現(xiàn)在可以在綠色，橙色，紅色和遠(yuǎn)紅外通道中選擇各種顏色的活細(xì)胞熒光探針（請參見下面的激發(fā)和發(fā)射光譜圖）。

      SPY探針充分兼容了SiR探針的所有優(yōu)點(diǎn)，同時還做了許多實(shí)質(zhì)性的改進(jìn)，包括：

      1.熒光性質(zhì)–背景比SiR和SIR700探針還要小

      2.多種熒光團(tuán)覆蓋（例如，遠(yuǎn)紅色，橙色，紅色和綠色）

      3.靈敏度和選擇性高

      4.細(xì)胞通透性得到改善

      5.遵循與SiR相同的方案，孵育時間更短且濃度更低（探針持續(xù)時間更長，并且不影響細(xì)胞骨架動力學(xué)）

      6.無細(xì)胞毒性

SPY555-actin（Cat. ＃CY-SC202）是一種F-actin探針，性能類似于SiR-actin（Cat. CY-SC001），但在四甲基羅丹明（TMR）通道中，建議的最佳激發(fā)設(shè)置為555 nm，并且發(fā)射設(shè)置為580 nm。應(yīng)使用與SiR-actin（Cat. ＃CY-SC001）相同的染色方案在標(biāo)準(zhǔn)TMR或Cy3通道中對SPY555-actin成像。廠家建議的活細(xì)胞染色條件為100 nM，持續(xù)2小時。	SPY555-微管蛋白（Cat. ＃CY-SC203）是一種微管探針，性能優(yōu)于SiR-微管蛋白（Cat. ＃CY-SC007），但在四甲基羅丹明（TMR）通道中，建議的最佳激發(fā)設(shè)置為555 nm，且發(fā)射光最佳設(shè)置為580 nm。應(yīng)使用與SiR-微管蛋白（Cat. ＃CY-SC002）相同的常規(guī)染色方案，在標(biāo)準(zhǔn)TMR或Cy3通道中對SPY555-微管蛋白成像。但是，由于SPY555-微管蛋白比SiR-微管蛋白具有更高的細(xì)胞滲透性，因此廠家建議的活細(xì)胞染色條件為10 nM，持續(xù)2小時。
SPY505-DNA（Cat. ＃CY-SC101）是綠色通道DNA探針，最佳激發(fā)為510 nm，發(fā)射為530 nm。SPY515-DNA應(yīng)該在異硫氰酸熒光素（FITC）或黃色熒光蛋白（YFP）通道中成像，并使用與SiR-DNA（Cat. ＃CY-SC007）相同的染色方案。廠家建議的活細(xì)胞染色條件為100 nM，持續(xù)2h。	SPY555-DNA（Cat. ＃CY-SC201）是三甲基羅丹明（TMR）通道DNA探針，最佳激發(fā)為555 nm，發(fā)射為580 nm。應(yīng)使用與SiR-DNA（Cat. ＃CY-SC007）相同的染色方案在TMR或Cy3通道中對SPY555-DNA進(jìn)行成像。廠家建議的活細(xì)胞染色條件為100 nM，持續(xù)2h。

      我們的SPY探針的優(yōu)勢在哪？

      常見問題：

      Q1. 什么是STED顯微鏡及其工作原理？

      A1: STED顯微鏡是受激發(fā)射損耗顯微鏡（Stimulated Emission Depletion microscopy）, 它是一種超分辨率顯微技術(shù)，與傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡相比，它可以捕獲分辨率更高的圖像，而傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡卻受到光衍射的限制，STED使用2個激光脈沖，其中之一是激發(fā)脈沖，激發(fā)熒光團(tuán)使其發(fā)出熒光；第二個脈沖稱為STED脈沖，當(dāng)激發(fā)脈沖的照射使得其衍射斑范圍內(nèi)的熒光分子被激發(fā)，其中的電子躍遷到激發(fā)態(tài)后，損耗光使得部分處于激發(fā)光斑外圍的電子以受激發(fā)射的方式回到基態(tài)，其余位于激發(fā)光斑中心的被激發(fā)電子則不受損耗光的影響，繼續(xù)以自發(fā)熒光的方式回到基態(tài)。這是通過將STED脈沖聚焦成環(huán)形來實(shí)現(xiàn)的，其中中心焦點(diǎn)沒有STED激光脈沖，從而為熒光區(qū)域提供高分辨率（圖1）。

圖1.在人類原代皮膚成纖維細(xì)胞中用SiR-微管蛋白標(biāo)記的微管的STED顯微圖像

       Q2. 為什么SPY肌動蛋白（或微管蛋白/ DNA）探針對STED顯微鏡有效？

       A2: STED顯微鏡可在體內(nèi)以納米摩爾量級分析細(xì)胞的細(xì)節(jié)，為了利用這種超高分辨率顯微鏡，必須能夠以高特異性選擇使用熒光探針檢查的區(qū)域。此外，熒光探針必須明亮，耐光，無或幾乎沒有光毒，被激發(fā)并在遠(yuǎn)紅色光譜中發(fā)射。另外，如果將探針用于活細(xì)胞成像，則需要探針具備很高的細(xì)胞通透性，SPY肌動蛋白和微管蛋白探針可滿足所有這些要求。簡而言之，STED和SiR探針的組合可實(shí)現(xiàn)亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)（肌動蛋白，微管蛋白，微管結(jié)構(gòu)）無與倫比的熒光可視化，以及描述它們在活細(xì)胞中的物理特征（見下圖）。

用SiR-Actin染色的培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的STED圖像	右邊的圖像是左邊圖像的一部分的特寫視圖，可以清晰地看到直徑為180 nm的肌動蛋白環(huán)（條紋）

       Q3 ：SPY探針在室溫下穩(wěn)定嗎？

      A3：探針在室溫下可以穩(wěn)定幾天，但是，穩(wěn)定性在很大程度上取決于探針和溶劑。因此，建議將所有探針或溶液保存在–20°C以下。

       Q4：SPY-肌動蛋白，SPY-DNA和SPY-微管蛋白對細(xì)胞有毒嗎？

      A4：是的，超過一定閾值，兩種探針均顯示出對細(xì)胞增殖和肌動蛋白或微管動力學(xué)改變的影響。但是，這些探針的毒性比其母體藥物低幾個數(shù)量級。在HeLa細(xì)胞中，染料濃度低于100 nM肌動蛋白或微管動力學(xué)都不會發(fā)生改變，在此濃度下，SPY探針可有效標(biāo)記微管和F-actin，從而捕獲高信噪比的圖像。

       艾美捷科技有限公司，通過提供完整的產(chǎn)品和服務(wù)體系、便利的客戶關(guān)系和供應(yīng)鏈管理，為生命科學(xué)研究工作者提供整體打包方案。我們的企業(yè)的核心價值觀：“學(xué)習(xí)、創(chuàng)新、合作、卓越”。激發(fā)我們內(nèi)在的創(chuàng)造力，提供有競爭力的生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)品和服務(wù)，持續(xù)為客戶創(chuàng)造最大價值是我們的企業(yè)使命。我們的企業(yè)愿景是成為受人尊重、世界一流的生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)品及服務(wù)供應(yīng)商。

      作為一家具有尖端的技術(shù)實(shí)力、一流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)，總部位于武漢光谷國家級高新技術(shù)開發(fā)區(qū)，服務(wù)面向全國。艾美捷科技是集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，為用戶提供最前沿的專業(yè)資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案，及優(yōu)質(zhì)的物流服務(wù)。為了更好的服務(wù)客戶，公司組建了一支經(jīng)驗(yàn)豐富的研發(fā)團(tuán)隊(duì)-艾美捷生物技術(shù)中心，進(jìn)入研發(fā)生產(chǎn)階段，將更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品推薦給國內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁們!

                 艾美捷定位：通過提供完整的產(chǎn)品和服務(wù)體系、便利的客戶關(guān)系和供應(yīng)鏈，為生命科學(xué)研究工作者提供整體打包方案。

                 艾美捷愿景：成為受人尊重、世界一流的生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)品及服務(wù)供應(yīng)商。

                 艾美捷使命：激發(fā)我們內(nèi)在的創(chuàng)造力，提供有競爭力的生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)品和服務(wù)，持續(xù)為客戶創(chuàng)造最大價值。