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熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中最有代表性的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶,分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase,同時(shí)近年來研究得較多的來源于高斯氏菌的高斯熒光素酶(Gauss luciferase)。
熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence),可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光,常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。

螢火蟲螢光素酶
最通用和最常見的報(bào)告基因是北美螢火蟲photinus pyralis的熒光素酶,該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度(體內(nèi))甚至沒有毒性,可用于原核和真核細(xì)胞。
Amplite™螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒

圖1.在帶有NOVOstar讀板器(BMG Labtech)的白色96孔板中,使用Amplite™螢光素酶報(bào)告基因基因檢測試劑盒(12518)檢測螢光素酶劑量反應(yīng)。該試劑盒可在20min-5h的孵育時(shí)間內(nèi)檢測到低至0.1pg /孔的螢光素酶,而不會(huì)丟失信號(hào)強(qiáng)度。半衰期超過4小時(shí)。
Amplite™螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(12518)使用無DTT專利配方來定量活細(xì)胞和細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性。該測定基于螢火蟲熒光素酶,螢火蟲熒光素酶是一種單體的61 kD酶,可催化熒光素的兩步氧化,在560 nm處產(chǎn)生光。
Amplite™螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒特點(diǎn):
具有優(yōu)化的“混合讀取”測定規(guī)程,可與HTS液體處理儀器兼容
具有高靈敏度,可用于需要低檢測限的測定
具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速,簡單且均一的生物發(fā)光測定法
與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基的使用兼容
高斯熒光素酶
近年來,其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20 kD的蛋白質(zhì),可通過氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來。
Amplite™高斯熒光素酶報(bào)告基因測定
圖2.用Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒(藍(lán)線,Cat#12530)和其他某品牌高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒(紅線)在96孔白板中使用NOVOstar讀板儀測量分泌的高斯熒光素酶培養(yǎng)基對(duì)比圖。
Amplite™高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),產(chǎn)生發(fā)光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。
Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒特點(diǎn):
提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件
它們具有高靈敏度,可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行
半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號(hào)在大量檢測板之間提供一致的信號(hào)
與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容
海腎熒光素酶
海腎螢光素酶是一種從海桑(Renilla reniformis)分離的36 kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,產(chǎn)生480 nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似,海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測。
Amplite™海腎熒光素酶報(bào)告基因測定
Amplite™Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒提供了一種快速,靈敏的方法,可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,與海腎螢光素酶相互作用后,該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物。
Amplite™海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒特點(diǎn):
該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容
該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)
每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分

圖3.用Amplite™Renilla熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(12535)在白色的96孔板中用NOVOstar酶標(biāo)儀(BMG Labtech)測量了Renilla熒光素酶。
各類螢光素酶底物,輔因子和物理特性:
| 螢光素酶 | 分子量(kDa) | 底物 | 輔因子 | 分泌型 |
| 北美螢火蟲熒光素酶 | 61 | D-螢光素 | 鎂,ATP | 不是 |
| 日本螢火蟲(Genji-botaru)熒光素酶 | 64 | D-螢光素 | 鎂,ATP | 不是 |
| 意大利螢火蟲螢光素酶 | 64 | D-螢光素 | 鎂,ATP | 不是 |
| 日本螢火蟲(Heike)螢光素酶 | 64 | D-螢光素 | 鎂,ATP | 不是 |
| 東歐螢火蟲熒光素酶 | 64 | D-螢光素 | 鎂,ATP | 不是 |
| 賓夕法尼亞螢火蟲螢光素酶 | 64 | D-螢光素 | 鎂,ATP | 不是 |
| 單擊甲蟲螢光素酶 | 64 | D-螢光素 | 鎂,ATP | 不是 |
| 鐵路蠕蟲螢光素酶 | 64 | D-螢光素 | 鎂,ATP | 不是 |
| 海腎熒光素酶 | 36 | 腔腸素 | 無 | 不是 |
| Rluc8(海腎熒光素酶的突變體) | 36 | 腔腸素 | 無 | 不是 |
| 綠色海腎熒光素酶 | 36 | 腔腸素 | 無 | 不是 |
| 高斯熒光素酶 | 20 | 腔腸素 | 無 | 是 |
| 高斯硬腦膜熒光素酶 | 20 | 腔腸素 | 無 | 是 |
| 藍(lán)藻熒光素酶 | 62 | Vargulin /絲豆素?zé)晒馑?/span> | 無 | 是 |
| 塞浦路斯(Vargula)熒光素酶 | 62 | Vargulin /絲豆素?zé)晒馑?/span> | 無 | 是 |
| 螢光素酶 | 23.8 | 腔腸素 | 無 | 是 |
| 奧盧克 | 19 | 腔腸素 | 無 | 是 |
熒光素酶報(bào)告基因檢測產(chǎn)品推薦:
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | Ex (nm) | Em(nm) |
| 12530 | Amplite 高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | 1plate | 429 | 466 |
| 12518 | Amplite 熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | 1plate | / | 560 |
| 12535 | Amplite 海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | 1plate | 429 | 466 |
| 12501 | D-熒光素 游離酸 CAS 2591-17-5 | 25mg | 328 | 533 |
| 12505 | D-熒光素鉀鹽 CAS 115144-35-9 | 25mg | 328 | 533 |
| 12509 | D-熒光素鈉鹽 CAS 103404-75-7 | 25mg | 328 | 533 |
| 12500 | 熒光素酶 重組熒光素 | 1ml | / | / |
| 12535 | Amplite 海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | 1plate | 429 | 466 |
作為一家具有高端的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè),總部位于武漢光谷高新技術(shù)開發(fā)區(qū),服務(wù)面向全國。艾美捷科技是集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案,及優(yōu)質(zhì)的物流服務(wù)。為了更好的服務(wù)客戶,公司組建了一支經(jīng)驗(yàn)豐富的研發(fā)團(tuán)隊(duì)-艾美捷生物技術(shù)中心,進(jìn)入研發(fā)生產(chǎn)階段,將更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品推薦給國內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁們!
艾美捷科技與國內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商優(yōu)保持著密切的合作關(guān)系,目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級(jí)代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在短時(shí)間內(nèi)為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。
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