AAT Bioquest的mFluor?染料專為多色流式細胞術應用而開發(fā)。這些染料具有較大的斯托克斯位移，并且可以很好地被流式細胞儀的激光線激發(fā)（例如355nm、405nm、488nm和633nm）。mFluor?UV375（MFUV375）染料的熒光激發(fā)和發(fā)射最大值分別為~355nm和~375nm。這些光譜特性使它們成為BD Biosciences BUV395的絕佳替代品。mFluor?UV375染料被355nm的紫外激光很好地激發(fā)，發(fā)射中心約為375nm，與BUV 395使用的379/28nm濾光片組完美匹配。與基于聚合物的BUV 395染料相比，MFUV375是一種很容易與抗體結合的小有機分子。它比BUV395明顯更暗，可能用于更亮的標記（如CD4）。

艾美捷AAT Bioquest-mFluor UV375 SE ：

單位大小 1 毫克

目錄編號 1135

分子量 782.95

溶劑 DMSO

吸收峰（納米） 342

校正因子（260 納米） 0.099

校正因子（280 納米） 0.138

消光系數（厘米 -1 M -1） 30000

激發(fā)（納米） 351

發(fā)射（納米） 387

量子產率 0.94

H-短語 H303, H313, H333

危害符號 XN

預期用途 僅限研究使用（RUO）

R-短語 R20, R21, R22

儲存 冷凍（< -15°C）；盡量減少光照

UNSPSC 12171501

圖：頂部 光譜圖案是使用4激光光譜細胞儀生成的。空間偏移激光器（355 nm、405 nm、488 nm和640 nm）用于生成四種不同的發(fā)射輪廓，然后組合在一起，產生整體光譜特征。底部）用mFluor?UV375抗人CD4綴合物染色的全血細胞的流式細胞術分析。使用極光光譜流式細胞儀在mFluor?UV375特異性UV2-A通道中監(jiān)測熒光信號。

樣品實驗方案

該標記方案是為山羊抗小鼠IgG與mFluor? UV375 SE的偶聯(lián)而開發(fā)的。您可能需要根據您的特定蛋白質進行進一步優(yōu)化。

注意     每種蛋白質需要不同的染料/蛋白質比例，這也取決于染料的性質。過度標記蛋白質可能會對其結合親和力產生不利影響，而染料/蛋白質比例過低的蛋白質偶聯(lián)物則會導致靈敏度降低。

進行偶聯(lián)反應

以10:1的溶液B（染料）/溶液A（蛋白質）的摩爾比作為起始點：將5微升的染料庫存溶液（溶液B，假設染料庫存溶液為10 mM）加入到蛋白質溶液（95微升溶液A）的小瓶中，并有效搖動。假設蛋白質濃度為10 mg/mL，蛋白質分子量約為200KD，則蛋白質的濃度約為0.05 mM。

注意     我們建議使用10:1的溶液B（染料）/溶液A（蛋白質）的摩爾比。如果這個比例太低或太高，請分別確定5:1、15:1和20:1的最佳染料/蛋白質比例。

繼續(xù)在室溫下旋轉或搖動反應混合物30-60分鐘。

純化偶聯(lián)物

以下是一個使用Sephadex G-25柱純化染料-蛋白質偶聯(lián)物的例子。

根據制造商的說明準備Sephadex G-25柱。

將反應混合物（來自“進行偶聯(lián)反應”）加載到Sephadex G-25柱的頂部。

當樣品剛運行到頂部樹脂表面下方時，立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

向所需的樣品中加入更多的PBS（pH 7.2-7.4）以完成柱純化。合并含有所需染料-蛋白質偶聯(lián)物的分數。

注意     如果立即使用，染料-蛋白質偶聯(lián)物需要用染色緩沖液稀釋，并分裝多次使用。

注意     對于長期儲存，染料-蛋白質偶聯(lián)物溶液需要濃縮或冷凍干燥。

AAT Bioquest-mFluor UV375 SE 文獻參考：

Sequential ordering among multicolor fluorophores for protein labeling facility via aggregation-elimination based beta-lactam probes

Authors: Sadhu KK, Mizukami S, Watanabe S, Kikuchi K.

Journal: Mol Biosyst (2011): 1766

Visualizing dengue virus through Alexa Fluor labeling

Authors: Zhang S, Tan HC, Ooi EE.

Journal: J Vis Exp. (2011)

Fluorescent "Turn-on" system utilizing a quencher-conjugated peptide for specific protein labeling of living cells

Authors: Arai S, Yoon SI, Murata A, Takabayashi M, Wu X, Lu Y, Takeoka S, Ozaki M.

Journal: Biochem Biophys Res Commun (2011): 211

Neuroanatomical basis of clinical joint application of "Jinggu" (BL 64, a source-acupoint) and "Dazhong" (KI 4, a Luo-acupoint) in the rat: a double-labeling study of cholera toxin subunit B conjugated with Alexa Fluor 488 and 594

Authors: Cui JJ, Zhu XL, Ji CF, Jing XH, Bai WZ.

Journal: Zhen Ci Yan Jiu (2011): 262

Simultaneous detection of virulence factors from a colony in diarrheagenic Escherichia coli by a multiplex PCR assay with Alexa Fluor-labeled primers

Authors: Kuwayama M, Shigemoto N, Oohara S, Tanizawa Y, Yamada H, Takeda Y, Matsuo T, Fukuda S.

Journal: J Microbiol Methods (2011): 119

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