背景

粗膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶的幾種亞型，一種巰基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一種胰蛋白酶樣酶和一種氨基肽酶。這種膠原溶解和蛋白水解活性的組合可有效分解細(xì)胞間基質(zhì)，這是組織解離的重要組成部分。該復(fù)合物的一種成分是水解酶，其優(yōu)先降解天然膠原蛋白中的螺旋區(qū)域，優(yōu)先在序列Pro-Y-Gly-Pro中的Y-Gly鍵處降解，其中Y通常是中性氨基酸。這種裂解產(chǎn)生易受進(jìn)一步肽酶消化的產(chǎn)物。粗膠原酶被半胱氨酸、EDTA或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制，但不受DFP抑制。它還被α2-巨球蛋白（一種大的血漿糖蛋白）抑制。Ca2+是酶活性所必需的。每種膠原酶的特定酶譜與獲得待研究細(xì)胞的組織（或與放置細(xì)胞的用途）相關(guān)，并且由于相關(guān)性，已經(jīng)建立了幾種類型的粗膠原酶。粗膠原酶廣泛用于酶原代細(xì)胞分離和組織解離程序。大多數(shù)研究人員使用粗膠原酶制劑，例如 1、2、3 和 4 型或色譜純化的膠原酶;后者通常與彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等次級(jí)酶結(jié)合。膠原酶是專注于干細(xì)胞和生物標(biāo)志物研究的研究的理想選擇。   

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膠原酶4型應(yīng)用說明：

4型膠原酶含有較低的胰蛋白酶活性水平，以限制對(duì)膜蛋白和受體的損傷，但膠原酶活性正常至高于正常水平。建議用于胰島原發(fā)性分離。膠原酶通常在平衡鹽溶液（如Hank's，Earle's等）中以0.05%至0.5%（w / v）的濃度使用。為了獲得最佳結(jié)果，膠原酶和蛋白水解活性的精確混合物必須針對(duì)要解離的組織進(jìn)行調(diào)整。反應(yīng)性的具體條件應(yīng)由最終用戶優(yōu)化。  

純度/特異性

4型膠原酶被部分純化，其胰蛋白酶活性特別低，以限制對(duì)膜蛋白和受體的損傷。膠原酶測(cè)定是Mandl膠原消化程序的修改，其中膠原酶與天然膠原蛋白一起孵育五小時(shí)，并使用Moore和Stein，JBC，176，367，（1948）比色茚三酮方法確定膠原蛋白分解的程度。釋放的氨基酸在5°C，pH 37.7下5小時(shí)內(nèi)以微摩爾L-亮氨酸每毫克膠原酶表示。酪蛋白酶活性是非特異性蛋白水解活性的量度，使用上述測(cè)定法測(cè)定，并用25毫克無維生素酪蛋白代替膠原蛋白底物。酪蛋白酶活性的計(jì)算與膠原酶活性相同。在2.5mM二硫蘇糖醇（DTT）中激活后測(cè)量clostripain活性。活化后，一個(gè)單位在 25°C、pH 7.6 下每分鐘水解一微摩爾的 BAEE。胰蛋白酶活性使用與梭菌蛋白酶相同的BAEE方法測(cè)定，但沒有活化。   

相關(guān)參數(shù)：

• 描述：膠原酶 4 型 - MB-121-0100

• 同義詞：溶組織梭菌，細(xì)菌膠原酶，膠原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶，ColH，ColG

• 原產(chǎn)物種：溶組織梭菌

• 試劑類型：酶

• 物理狀態(tài)：凍

• 濃度：270 u/mgdw（按干重計(jì)）

• 緩沖區(qū)：沒有

• 防腐劑：沒有

• 穩(wěn)定：沒有

• 復(fù)溶體積：10.0毫升

• 重構(gòu)緩沖區(qū)：用去離子水（或同等水）恢復(fù)

• 運(yùn)輸條件：氛圍

• 儲(chǔ)存條件：打開前將小瓶?jī)?chǔ)存在2-8°C。將內(nèi)容物分裝并在 -20° C 或更低溫度下冷凍以延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間。避免冷凍和解凍的循環(huán)。離心機(jī)產(chǎn)品在室溫下靜置后如果不能完全澄清。僅在立即使用前稀釋。

• 呼氣：有效期為自收到之日起一 （1） 年。

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