磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC），EC=4.1.1.31，屬于一個(gè)羧酸裂解酶家族，它催化將二氧化碳添加到磷酸烯醇式乙酸鹽（PEP）中形成草酰乙酸鹽。備選名稱：PEPCase 1、PEPCase 3、PEPC 1、PEPC 3。   

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磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基本參數(shù)：

• 免疫原：KLH綴合的合成肽高度保守的PEPC1和來自不同植物物種的序列，包括擬南芥Q9MAH0、At1g53310（PEPC1）、Q84VW9、At3g14940（PEPC3）。被選擇來引發(fā)該抗體的肽在該酶的細(xì)菌類型NP_177043.2（PEPC4）中也是完全保守的。對(duì)于玉米來說，肽以PEP1和PEP4異構(gòu)體的形式存在。

• 宿主：兔子

• 克隆性：多克隆

• 純度：在pH 7.4的PBS中的免疫原親和純化血清。

• 格式化：凍干

• 數(shù)量：50?g

• 重組：為重組添加50?l無(wú)菌水

• 儲(chǔ)存：在-20°C條件下冷凍干燥/復(fù)原儲(chǔ)存；一旦復(fù)原，就制作等分試樣，以避免重復(fù)的凍融循環(huán)。請(qǐng)記得在打開管子之前先短暫旋轉(zhuǎn)管子，以避免材料粘附在管子的蓋子或側(cè)面可能造成的任何損失。請(qǐng)不要重復(fù)使用此初級(jí)抗體溶液。在藍(lán)細(xì)菌樣本的情況下，第二次孵育時(shí)將沒有信號(hào)。

• 測(cè)試應(yīng)用：免疫定位（IL）、蛋白質(zhì)印跡（WB）

• 推薦稀釋度：1:500（IL），1/1000-：10000（WB）

磷酸烯醇丙酮酸羧化酶應(yīng)用示例：

在4-12%NuPage（Invitrogen）LDS-PAGE上分離來自（1）用蛋白質(zhì)提取緩沖液提取的擬南芥葉、PEB（AS08 300）、（2）用PEB提取的菠菜總細(xì)胞、（3）用PEB提取的大麥總細(xì)胞和（4）用PE布提取的玉米總細(xì)胞的5?g總蛋白，并用PVDF印跡1h。在室溫下，在攪拌下，在20mM Tris、137mM氯化鈉（pH 7.6）和0.1%（v/v）Tween-20（TBS-T）中轉(zhuǎn)移2%封閉試劑（GE Healthcare）1小時(shí)后，立即封閉印跡。將印跡在1∶10000稀釋的一級(jí)抗體中在室溫下攪拌孵育1h。傾析抗體溶液，并短暫漂洗印跡兩次，然后在室溫下攪拌下在TBS-T中洗滌一次15分鐘和3次5分鐘。在室溫下，將印跡在2%封閉溶液中稀釋至1:50000的第二抗體（抗兔IgG馬蘿卜過氧化物酶綴合物）中攪拌孵育1h。如上所述洗滌印跡，并根據(jù)制造商說明用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑顯影5分鐘。使用CCD成像器（FluorSMax，Bio-Rad）和Quantity One軟件（Bio-Rad）獲得印跡的圖像。  

部分引用文獻(xiàn)：

• Durall et al. (2021). Production of succinate by engineered strains of Synechocystis PCC 6803 overexpressing phosphoenolpyruvate carboxylase and a glyoxylate shunt. Microb Cell Fact. 2021 Feb 8;20(1):39. doi: 10.1186/s12934-021-01529-y. PMID: 33557832; PMCID: PMC7871529.

• Wang et al. (2021). Brassinosteroids inhibit miRNA-mediated translational repression by decreasing AGO1 on the endoplasmic reticulum. J Integr Plant Biol. 2021 May 21. doi: 10.1111/jipb.13139. Epub ahead of print. PMID: 34020507.

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