曾經(jīng)有小伙伴反應(yīng)，我的目的蛋白做WB沒(méi)有條帶或者條帶特別淡，做IHC也沒(méi)有陽(yáng)性結(jié)果，嘗試了不同稀釋比的抗原，一抗，二抗，更換了不同廠家生產(chǎn)的抗體，結(jié)果還是不好，內(nèi)參和其他蛋白都有正常的結(jié)果，到底是什么原因了？最后我們提醒客戶，是不是目的蛋白本身的表達(dá)量就非常低，增加抗體濃度的作用也是非常有限的，最后客戶又看到相關(guān)文獻(xiàn)，報(bào)道該目的蛋白在正常樣本種表達(dá)量確實(shí)特別低，都到皮克級(jí)別了，難怪常規(guī)的WB和IHC檢測(cè)結(jié)果不好，于是我們給客戶推薦了多聚HRP標(biāo)記的二抗，成功檢測(cè)到了陽(yáng)性結(jié)果。

Poly HRP是一種增強(qiáng)信號(hào)的酶標(biāo)記物，由共價(jià)辣根過(guò)氧化物酶（HRP）聚合物組成。目的蛋白的信號(hào)通過(guò)抗體傳遞給Poly HRP上攜帶的大量HRP分子，然后HRP分子作用于底物釋放信號(hào)，使得目的蛋白檢測(cè)信號(hào)得到放大，這些信號(hào)放大程度與HRP聚合范圍成正比，從而可以利用多聚HRP在免疫分析中檢測(cè)到低豐度蛋白（pg級(jí)別范圍）。

HRP聚合體以及SA－PolyHRP40示意圖

注：

灰色的是SA（鏈霉親和素）

褐色的是HRP

鏈霉親和素-poly HRP綴合物（SA－PolyHRP）由五個(gè)相同的HRP同聚物組成，同時(shí)與多個(gè)鏈霉親和素分子共價(jià)偶聯(lián)。目前生產(chǎn)過(guò)程中使用了三種不同的同聚物，它們分別是PolyHRP20、PolyHRP40和PolyHRP80。鏈霉親和素-PolyHRP80比鏈霉親和素-PolyHRP40靈敏度更高，鏈霉親和素-PolyHRP40比鏈霉親和素-PolyHRP20靈敏度更高。

不同尺寸HRP多聚體示意圖

用鏈霉親和素-PolyHRP技術(shù)檢測(cè)技術(shù)標(biāo)記非常簡(jiǎn)單，可以將它們結(jié)合到現(xiàn)有的測(cè)定系統(tǒng)中，現(xiàn)有的步驟，孵育間隔等幾乎不需要改變。所需試劑基本上與使用標(biāo)準(zhǔn)鏈霉親和素-HRP進(jìn)行的常規(guī)ELISA相同。類似地，PolyHRP幾乎可用于任何以HRP底物開(kāi)發(fā)的檢測(cè)系統(tǒng)（比色法、熒光法、包括化學(xué)發(fā)光），這也意味著與現(xiàn)有的ELISA和IHC儀器完全兼容。PolyHRP檢測(cè)可能有利的其他分析方法包括高靈敏度DNA/RNA雜交分析和配體受體分析。

PolyHRP的優(yōu)勢(shì)：

靈敏度高：polyHRP可以檢測(cè)極低的目標(biāo)(皮克-飛克范圍)，信噪比高；

靈活：兼容的顯色，熒光和化學(xué)發(fā)光底物

高效：試劑純度高，不含未結(jié)合的分子，具有高比活度和低背景

穩(wěn)定：即用型液體試劑可保存在4℃，

性價(jià)比高：每次測(cè)定所需的偶聯(lián)物遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于常規(guī)測(cè)定

用途多樣：兼容ELISA, Western blotting，免疫組化等

易于使用：可直接替代免疫分析和其他檢測(cè)方法

在這里小艾給大家推薦艾美捷科技代理品牌Fitzgerald生產(chǎn)的多聚HRP相關(guān)產(chǎn)品，包括鏈霉親和素-polyHRP（Streptavidin Poly-HRP），polyHRP標(biāo)記的各類二抗：

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