TECHNICAL COLUMN
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1.瓊脂糖電泳,將特異電泳帶用刀切下放入到 EP 管中,稱瓊脂糖帶的重量;
2. 按照每100mg 加 400?l 的量加入binding buffer,放入到 EP管振蕩器中,45℃~55℃溫育振蕩,直到所有的瓊脂糖都溶解(大概要 5 分鐘);
3. 取出純化柱,將上述溶解液轉移至柱中,室溫下放置 2 分鐘,8,000rpm 離心1 分鐘,棄 EP 管中的液體,將純化柱放回 EP 管中;
4. 加 500?l 的 wash buffer 至柱中,8,000rpm 離心 1 分鐘。棄管中的溶液;
5. 重復操作 4 步的操作 1 次,最后將純化柱放入 EP 管中 10,000rpm 離心 30 秒,除去痕量的 wash buffer;
6. 將純化柱放入一個新的 EP 管。加 30~40?l H2O 或者 elution buffer 至純化柱膜的中央,在37℃或 50℃下放置 2 分鐘,10,000rpm 離心 1 分鐘洗脫 DNA,將EP 管中的 DNA 溶液放在-20℃保存。
7. 注:若想要不電泳而直接純化 DNA 溶液,只需要在第 2 步中按 100?l 液量加400?l 的 binding buffer,其余的步驟不變。
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