將蛋白質(zhì)上樣到膜上的直接方法是通過(guò)過(guò)濾，一個(gè)溶解的樣品可以通過(guò)抽真空而濾過(guò)膜。蛋白質(zhì)吸附到膜上，而樣品的其他組分則穿過(guò)膜。或者，將樣品直接點(diǎn)在表面上，并讓其干燥。固定在膜上的蛋白質(zhì)隨后可用于分析。

過(guò)濾（抽濾）

將蛋白質(zhì)上樣到膜上的直接方法是通過(guò)過(guò)濾，一個(gè)溶解的樣品可以通過(guò)抽真空而濾過(guò)膜。蛋白質(zhì)吸附到膜上，而樣品的其他組分則穿過(guò)膜（圖1）。或者，將樣品直接點(diǎn)在表面上，并讓其干燥。固定在膜上的蛋白質(zhì)隨后可用于分析。

圖1. 利用過(guò)濾的印跡系統(tǒng)

斑點(diǎn)印跡（圖2）和狹縫印跡是過(guò)濾方法的兩個(gè)版本，它們采用多管吸印儀（manifold），將樣品以斑點(diǎn)狀或狹縫狀上樣到膜上。這些技術(shù)被作為快速篩選大量樣品的定性方法，或分析相似樣品的定量技術(shù)。它在測(cè)試實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)參數(shù)是否適用于更復(fù)雜分析時(shí)特別有用。

圖2. 利用Western 化學(xué)發(fā)光HRP底物在人血清的斑點(diǎn)印跡上檢測(cè)轉(zhuǎn)鐵蛋白（詳見(jiàn)操作步驟1.4 斑點(diǎn)印跡）。利用山羊抗轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體和兔抗山羊HRP結(jié)合的二抗，在P轉(zhuǎn)印膜上檢測(cè)連續(xù)稀釋血清中的轉(zhuǎn)鐵蛋白，重復(fù)兩次。

過(guò)濾方法的另一個(gè)版本是網(wǎng)格免疫印跡，當(dāng)樣品量非常有限，無(wú)法用ELISA等傳統(tǒng)技術(shù)來(lái)開(kāi)展分析時(shí)，這種技術(shù)很有用，適合高度并行的樣品分析。例如，網(wǎng)格免疫印跡已用于過(guò)敏原特異的抗體應(yīng)答鑒定，只需要極少量的患者血清。

在制備過(guò)濾法印跡時(shí)，請(qǐng)注意以下方面：

? 去污劑會(huì)抑制蛋白質(zhì)吸附到膜上。樣品溶解和清洗所用的緩沖液中的去污劑應(yīng)不超過(guò)0.05%，且只在需要時(shí)添加。

? 樣品量應(yīng)足夠大，以覆蓋每孔中暴露的膜，但又不能超過(guò)膜的結(jié)合能力。

? 顆粒負(fù)載高的樣品可能會(huì)堵塞膜，而那些高粘度的樣品會(huì)降低流速。顆粒應(yīng)通過(guò)預(yù)過(guò)濾或離心來(lái)去除，并只將上清上樣到膜上。粘稠的樣品應(yīng)用緩沖液稀釋。