熒光素是最受歡迎和用途最廣泛的生物發(fā)光底物。螢火蟲熒光素酶/熒光素生物發(fā)光系統存在于螢火蟲 (Photinus pyralis) 和其他幾種甲蟲中。熒光素酶通過二氧雜烯酮中間體氧化 ATP 激活的熒光素。螢火蟲熒光素酶通過熒光素的 ATP 依賴性氧化產生光。該反應產生的 530 nm 化學發(fā)光在幾秒鐘內達到峰值,當熒光素和 ATP 過量時,光輸出與熒光素酶活性成正比。長期以來,螢火蟲熒光素酶一直與抗體偶聯,并在免疫測定中使用熒光素作為檢測底物用作標記物。與 HRP 和堿性磷酸酶相比,熒光素酶對化學修飾的耐受性較差。該酶的一個特殊優(yōu)點是,除了高靈敏度外,哺乳動物組織中的內源性熒光素酶活性較低。熒光素酶的另一個重要用途是衛(wèi)生監(jiān)測領域。熒光素酶/熒光素系統可用于檢測污染,因為所有生物體中都存在的 ATP 是產生發(fā)光所必需的。這種類型的 ATP 生物發(fā)光的主要應用是通過測試食品加工廠的表面來確定設備或產品是否存在任何污染來保證質量。