二抗是在異宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上面通常連有酶、熒光素或生物素等偶聯(lián)標(biāo)記。二抗能對(duì)某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG、IgM 或IgA 等）均產(chǎn)生反應(yīng)，因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用；此外，一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子，從而使信號(hào)大大增強(qiáng)，提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。

       另外，免疫學(xué)試驗(yàn)中常通過(guò)封閉試劑來(lái)封閉未吸附蛋白的固相載體部位，以減少非特異性結(jié)合背景的影響。比如ELISA 試驗(yàn)中繼包被之后用0.05-0.5% BSA 等溶液來(lái)占據(jù)未能被包被的空隙；又如WB 試驗(yàn)中常用5% 脫脂奶粉或者BSA 封閉膜上除轉(zhuǎn)印蛋白占據(jù)的其它部位。除了用于封閉未吸附蛋白的固相載體，封閉試劑也被廣泛用于封閉其它非特異性結(jié)合。如ELISA 實(shí)驗(yàn)中，特異性抗體與血清樣本中IgM、IgG 型類(lèi)風(fēng)濕因子以及補(bǔ)體等組分產(chǎn)生非特異性結(jié)合；IHC、IF 等試驗(yàn)中，特異性抗體與樣本中Fc 受體的結(jié)合，以及在IHC 和IF 雙染或三染實(shí)驗(yàn)中，驢血清也被廣泛用于封閉試劑以減少抗體之間的非特異性結(jié)合；另外，F(xiàn)ab 片段單鏈二抗也被用于熒光雙染中的有效封閉。

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