自主神經(jīng)系統(tǒng)（Autonomic Nervous System, ANS）與免疫系統(tǒng)之間存在著密切的聯(lián)系。ANS通過神經(jīng)纖維直接支配淋巴器官，包括脾臟，從而提供了中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）與免疫系統(tǒng)之間的橋梁。在脾臟中，已知的唯一神經(jīng)抑制炎癥的機(jī)制依賴于由脾臟去甲腎上腺素能纖維產(chǎn)生的去甲腎上腺素，這種去甲腎上腺素與CD4+ T細(xì)胞上的β2腎上腺素能受體（β2-ARs）結(jié)合，進(jìn)而觸發(fā)乙酰膽堿的釋放。乙酰膽堿隨后通過與髓樣細(xì)胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7nAChRs）結(jié)合，抑制炎癥細(xì)胞因子的分泌。盡管迷走神經(jīng)抗炎通路在嚙齒類動(dòng)物中得到了廣泛研究，但尚不清楚是否還存在其他神經(jīng)通路。

“Apical splenic nerve electrical stimulation discloses an anti-inflammatory pathway relying on adrenergic and nicotinic receptors in myeloid cells”旨在探討脾臟神經(jīng)在調(diào)節(jié)炎癥中的作用，并確定是否存在除迷走神經(jīng)抗炎通路之外的其他神經(jīng)通路。特別地，研究關(guān)注于脾臟神經(jīng)的解剖和功能特性，以及電刺激這些神經(jīng)對(duì)炎癥的影響。

實(shí)驗(yàn)方法

1. 動(dòng)物模型與分組：實(shí)驗(yàn)使用了多種小鼠品系，包括C57BL/6、DBA、Foxn1-/-（T細(xì)胞缺陷）、Rag1-/-（T和B細(xì)胞缺陷）、LysM-Cre:Adrb2fl/fl（髓系細(xì)胞β2-ARs敲除）、LysM-Cre:Chrna7fl/fl（髓系細(xì)胞α7nAChRs敲除）等。實(shí)驗(yàn)分為多個(gè)組別，包括假手術(shù)組（SHAM）、不同神經(jīng)刺激組（如迷走神經(jīng)刺激、動(dòng)脈脾神經(jīng)刺激、頂端脾神經(jīng)刺激）以及不同基因敲除小鼠組。

2. 神經(jīng)刺激與參數(shù)：使用特制的電極對(duì)小鼠的迷走神經(jīng)、動(dòng)脈脾神經(jīng)或頂端脾神經(jīng)進(jìn)行電刺激。刺激參數(shù)為矩形雙相脈沖，脈沖幅度為650 ?A，脈沖寬度為100 ?s，頻率為10 Hz，持續(xù)時(shí)間為2分鐘。

3. 生理指標(biāo)監(jiān)測(cè)：在麻醉小鼠中監(jiān)測(cè)頸動(dòng)脈血壓和心率，以評(píng)估神經(jīng)刺激對(duì)心血管系統(tǒng)的影響。

4. 炎癥模型與評(píng)估：使用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)小鼠內(nèi)毒素血癥模型，通過檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子（TNF）水平評(píng)估炎癥反應(yīng)。此外，還使用了II型膠原（品牌chondrex, 貨號(hào)20022）和與弗氏完全佐劑（貨號(hào):7009， 完全弗氏佐劑，2mg/ml）混合后免疫DBA小鼠，成功誘導(dǎo)了關(guān)節(jié)炎，通過臨床評(píng)分、組織病理學(xué)分析等方法評(píng)估關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度。

 如上圖：DBA小鼠在第0天用II型膠原蛋白進(jìn)行免疫接種，并將電極植入第11天脾臟頂部的脾神經(jīng)。在第21天，用II型膠原蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行加強(qiáng)免疫在35天內(nèi)每2-3天監(jiān)測(cè)一次臨床癥狀。數(shù)據(jù)顯示關(guān)節(jié)炎小鼠的百分比（a），平均臨床評(píng)分（b）和平均厚度后爪（c）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1. 神經(jīng)解剖與功能分析：通過免疫組織化學(xué)和激光共聚焦顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)小鼠脾臟有三條神經(jīng)分支：兩條與動(dòng)脈相關(guān)，包含兒茶酚胺能纖維；另一條位于脾臟頂端，同時(shí)包含兒茶酚胺能纖維和膽堿能纖維。電刺激頂端神經(jīng)而非動(dòng)脈神經(jīng)能顯著增加脾臟中ACh的含量，且這種增加不依賴于T細(xì)胞。

2. 神經(jīng)刺激對(duì)炎癥的抑制作用：電刺激迷走神經(jīng)、動(dòng)脈脾神經(jīng)或頂端脾神經(jīng)均能抑制LPS誘導(dǎo)的TNF產(chǎn)生，但機(jī)制不同。迷走神經(jīng)和動(dòng)脈脾神經(jīng)刺激依賴于T細(xì)胞，而頂端脾神經(jīng)刺激不依賴于T細(xì)胞，且其抑制作用可被β2-ARs和α7nAChRs的拮抗劑所阻斷，表明頂端脾神經(jīng)刺激通過平行作用于髓系細(xì)胞上的β2-ARs和α7nAChRs來抑制炎癥。

3. 頂端脾神經(jīng)刺激對(duì)CIA的抑制作用：在CIA小鼠中，電刺激頂端脾神經(jīng)顯著延遲了關(guān)節(jié)炎的發(fā)病時(shí)間，減輕了疾病嚴(yán)重程度，減少了關(guān)節(jié)腫脹和骨侵蝕，并降低了脾臟中炎癥性單核細(xì)胞的數(shù)量。這些結(jié)果表明，頂端脾神經(jīng)刺激可能通過抑制全身炎癥反應(yīng)來減輕關(guān)節(jié)炎癥狀。

在本研究中，Chondrex品牌的牛II型膠原被用于建立膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（CIA）模型。該模型是關(guān)節(jié)炎研究中的經(jīng)典模型之一，能夠模擬關(guān)節(jié)炎的病理特征和臨床表現(xiàn)。牛II型膠原作為CIA模型的誘導(dǎo)劑，通過與弗氏完全佐劑混合后注射到小鼠體內(nèi)，成功誘導(dǎo)了關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和發(fā)展。

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