由落花生（Arachis hypogaea）制成的粗提落花生提取物（CPE）在相對于其他食物過敏原方面具有最高的過敏性。已鑒定出11種潛在重要的落花生過敏原。其中，Ara h1、Ara h2、Ara h3和Ara h6被指定為主要落花生過敏原。粗提落花生提取物通常用作生化檢測（如西方印跡法和酶聯(lián)免疫吸附試驗，ELISA）的參考蛋白，也是動物過敏模型（如I型超敏反應(yīng)）中公認(rèn)的過敏原。

圖1. 在非還原條件下進(jìn)行的12% SDS-PAGE。

艾美捷Chondrex花生粗提取物（CPE）（#20041）：

應(yīng)用： 可用于ELISA和西方印跡法，也可以作為過敏原研究實驗動物中的過敏性疾病或進(jìn)行體外實驗。

數(shù)量： 10毫克

溶解度： 在pH 8.0緩沖液中為10毫克/毫升

形態(tài)： 凍干粉末

來源： 生花生粉（西班牙花生）

存儲： 存放于-20°C。重溶后請勿將產(chǎn)品長時間放置在4°C或室溫下。

穩(wěn)定性： 1年

Chondrex-花生粗提取物（CPE）實驗方案：

A. 重要提示：處理IgE抗體溶液

IgE抗體在極低濃度下具有生物活性，因此在處理和稀釋IgE抗體時需格外小心。通常，幾微克的蛋白質(zhì)可以通過非特異性疏水性結(jié)合吸附到1平方厘米的玻璃或塑料表面。因此，如果將1毫升20 ?g/ml的IgE抗體溶液（不含阻斷劑，如PBS）存放在微量離心管中，幾乎所有的IgE抗體都會被吸附到管壁上，溶液中將不會殘留可檢測的IgE抗體。請勿將IgE溶液稀釋至低于100 ?g/ml，因為PBS不含阻斷劑。可以向PBS中添加適當(dāng)?shù)淖钄鄤缧∈笱灏椎鞍住⑴Ｑ灏椎鞍祝˙SA）或其他合適的蛋白質(zhì)。Chondrex, Inc.提供IgE稀釋緩沖液（產(chǎn)品編號3009）用于體外和體內(nèi)實驗中IgE抗體的稀釋。

B. 體外脫顆粒肥大細(xì)胞的檢測

1. 培養(yǎng)肥大細(xì)胞，如大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞（RBL-2H3），直到靜止期。將細(xì)胞以1 x 10^6個細(xì)胞/ml的濃度重懸于含15%胎牛血清（FCS）的Eagle最小必需培養(yǎng)基中，并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到96孔（200 ?l: 2 x 10^5細(xì)胞/孔）或24孔（1 ml: 1 x 10^6細(xì)胞/孔）的平底細(xì)胞培養(yǎng)板中，在37°C下繼續(xù)培養(yǎng)至少3小時或過夜。

2. 向孔中添加用含阻斷劑的PBS或含F(xiàn)CS的培養(yǎng)基稀釋的IgE單克隆抗體（最終濃度：培養(yǎng)基中0-10 ?g/ml的IgE抗體），并孵育24小時。  

注意：IgE抗體可以在細(xì)胞培養(yǎng)開始時添加到培養(yǎng)基中，而不是在過夜培養(yǎng)后再添加。在這種情況下，F(xiàn)cεRI的表達(dá)可能會顯著上調(diào)。已有報道指出，在RBL-2H3細(xì)胞中，F(xiàn)cεRI的表達(dá)在24-48小時內(nèi)會上調(diào)2倍，在骨髓來源的肥大細(xì)胞中可上調(diào)至32倍。

3. 用PBS洗滌IgE致敏細(xì)胞3次。

4. 向96孔板添加200 ?l（或24孔板添加400 ?l）用Tyrode緩沖液稀釋的CPE溶液（150 mmol/l NaCl, 2.5 mmol/l KCl, 12 mmol/l NaHCO3, 2 mmol/l MgCl2, 2 mmol/l CaCl2, 1 mg/ml BSA, 1 mg/ml葡萄糖，pH 7.4），在37°C培養(yǎng)1小時（CPE的最終濃度為2 ?g/ml）。

5. 向陰性對照孔中添加200 ?l（在96孔板中）或400 ?l（在24孔板中）溶解在Tyrode緩沖液中的陰性對照抗原，例如BSA（2 ?g/ml），以確定β-氨基己糖酶的自發(fā)釋放。

6. 向100%對照孔中添加200 ?l（在96孔板中）或400 ?l（在24孔板中）的1% Triton X-100溶于Tyrode溶液中，以確定β-氨基己糖酶的總釋放。

7. 使用p-硝基苯基-N-乙酰β-D-葡萄糖胺作為底物檢測培養(yǎng)上清液中的β-氨基己糖酶活性。

Chondrex-花生粗提取物（CPE）文獻(xiàn)參考：

1. S. Kubo, K. Matsuoka, C. Taya, F. Kitamura, T. Takai, H. Yonekawa, H. Karasuyama, Drastic up-regulation of FceRI on mast cells is

induced by IgE binding through stabilization and accumulation of FceRI on the cell surfaces. J Immunol 167, 3427-34 (2001).

2. L. McKinley, J. Kim, G. Bolgos, J. Siddiqui, D. Remick, Reproducibility of a Novel Model of Murine Asthma-Like Pulmonary Inflammation.

Clin Exp Immunol 136, 224-31 (2004).

3. J. Kim, A. Merry, J. Nemzek, G. Bolgos, J. Siddiqui, D. Remick, et al., Eotaxin Represents the Principal Eosinophil Chemoattractant in

a Novel Murine Asthma Model Induced by House Dust Containing Cockroach Allergens. J Immunol 167, 2808-15 (2001).

Chondrex 致力于開發(fā)和生產(chǎn)高純度膠原蛋白、抗膠原蛋白單克隆抗體和多種ELISA試劑盒等產(chǎn)品，為研究人員提供研究類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)發(fā)病機(jī)制和篩選潛在治療方法所需的工具。艾美捷科技是Chondrex的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。