細(xì)胞滲透性鈣離子指示劑 · 高靈敏度 · 低毒性

Calbryte 520 AM 是AAT Bioquest公司開發(fā)的一種細(xì)胞滲透性熒光鈣離子（Ca²⁺）指示劑，貨號為 20650。該產(chǎn)品主要用于實時監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度動態(tài)變化，具有高靈敏度、低毒性以及與多種熒光探針兼容的特點。

·主要用途：實時監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的動態(tài)變化

·適用領(lǐng)域：心血管研究、神經(jīng)科學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)等

化學(xué)性質(zhì)與工作原理

化學(xué)結(jié)構(gòu)：

Calbryte 520 AM 為乙酰氧基甲酯（AM）衍生物，可通過被動擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞內(nèi)酯酶水解 AM 基團(tuán)后，釋放出游離的 Calbryte 520 熒光團(tuán)，與 Ca?? 結(jié)合后熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。

光譜特性：

1. 激發(fā)波長（λEx）：488 nm（與藍(lán)光激光兼容）

2. 發(fā)射波長（λEm）：515–540 nm（綠色熒光范圍）

3. 信號增強(qiáng)：與 Ca?? 結(jié)合時熒光信號可提升超過 100 倍，信噪比（SNR）高

親和力特點：

Calbryte 520 對 Ca?? 的親和力較低（Kd 約為 1–2 μM），適合檢測快速、高幅度的鈣瞬變，避免高親和力染料（如 Fura-2）的飽和問題。

核心優(yōu)勢：

? 長時程穩(wěn)定性：相較于 Fluo-4 AM 等傳統(tǒng)染料，Calbryte 520 AM 在細(xì)胞內(nèi)保留時間長達(dá) 24 小時，無需添加有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑（如 probenecid）。

? 多通道兼容性：其光譜特性使其可與紅色熒光探針（如 R-CEPIA1SR，用于肌質(zhì)網(wǎng)鈣成像）同時使用，實現(xiàn)雙通道鈣信號監(jiān)測。

? 高靈敏度與低背景：水解后的熒光團(tuán)與 Ca²⁺結(jié)合時產(chǎn)生明亮的熒光信號，背景干擾小，適用于活細(xì)胞動態(tài)成像。

應(yīng)用場景與實驗案例

1. 心血管研究

心肌細(xì)胞鈣動力學(xué)

用于人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化心肌細(xì)胞（hiPSC-CMs）的胞質(zhì)鈣濃度監(jiān)測，結(jié)合 R-CEPIA1SR 探針同步檢測肌質(zhì)網(wǎng)鈣釋放，研究心律失常機(jī)制（如兒茶酚胺敏感性多形性室速，CPVT）。

鈣瞬變與動作電位同步記錄

與膜電位探針 FluoVolt 聯(lián)用，實現(xiàn)鈣信號（Calbryte 520）與動作電位（FluoVolt）的雙通道光學(xué)映射（100–1000 fps）。

2. 神經(jīng)科學(xué)

神經(jīng)元光熱刺激研究

在 Ti3C2Tx MXene 材料介導(dǎo)的神經(jīng)刺激實驗中，Calbryte 520 AM 用于實時監(jiān)測背根神經(jīng)節(jié)（DRG）神經(jīng)元在光熱刺激下的鈣內(nèi)流，驗證神經(jīng)興奮性。

鈣信號與凋亡關(guān)聯(lián)研究

在巨噬細(xì)胞中，通過鈣成像分析炎癥或藥物處理后的鈣響應(yīng)。

3. 腫瘤與免疫學(xué)

腫瘤細(xì)胞鈣通量檢測

用于評估電磁場（如 5 mT 低頻磁場）對腫瘤細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的影響，揭示其抑制腫瘤生長的機(jī)制。

免疫細(xì)胞激活分析

在骨髓中性粒細(xì)胞（BMNs）中，監(jiān)測 PAF（血小板活化因子）刺激下的鈣信號動態(tài)，研究藥物（如人參皂苷 Rg5）的調(diào)控作用。

4. 骨與組織工程

成骨細(xì)胞鈣響應(yīng)

在電磁治療（EMTT）研究中，Calbryte 520 AM 用于檢測骨祖細(xì)胞（hOBs）內(nèi)鈣濃度的升高，驗證電場促進(jìn)骨礦化的機(jī)制。

實驗操作指南

1. 染料配制：將 Calbryte 520 AM 溶于含 0.04% Pluronic F-127 的緩沖液（如 HBSS 或 KRP-HEPES），終濃度通常為 5 μM。

2. 孵育條件：37°C 避光孵育 30–60 分鐘，隨后室溫平衡 15–30 分鐘以促進(jìn)酯酶水解。

3. 洗滌與成像：用緩沖液洗滌 3 次后，在熒光顯微鏡或微孔板讀數(shù)儀（激發(fā)/發(fā)射：490/525 nm）中觀察信號。

注意事項

·避免長時間光照，防止光漂白。

·實驗設(shè)計中需設(shè)置陰性對照（如未染色細(xì)胞）和陽性刺激（如離子霉素）以驗證染料響應(yīng)。

總結(jié)

Calbryte 520 AM 憑借其長時程穩(wěn)定性、低背景噪聲和廣泛兼容性，成為活細(xì)胞鈣成像的首選工具之一。無論是心血管疾病機(jī)制研究、神經(jīng)興奮性調(diào)控，還是腫瘤治療新策略開發(fā)，該產(chǎn)品均展現(xiàn)出強(qiáng)大的應(yīng)用潛力。歡迎垂詢，AAT Bioquest中國區(qū)總代理，艾美捷科技！