CHP在三維膠原培養(yǎng)中展示了癌細(xì)胞蛋白酶水解引起的細(xì)胞周基質(zhì)轉(zhuǎn)換過程，而不需要使用合成熒光基質(zhì)和基因修飾細(xì)胞。CHP可以在分子水平上檢測和定位膠原組織的機械損傷。CHP還可以用于評估脫細(xì)胞胞外基質(zhì)的膠原損傷。CHP可在SDS-PAGE凝膠中特異性地顯示膠原條帶，而無需進行western轉(zhuǎn)印。

CHP通過與SDS變性的膠原鏈進行三螺旋雜交，并在電泳過程中加熱，從而實現(xiàn)對SDS-PAGE凝膠中膠原帶的簡便、敏感和特異性檢測^[1]。簡單的程序消除了對western blot的需要(例如，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜和阻斷)，節(jié)省了時間，精力和材料。

熒光F-CHP直接在SDS-PAGE凝膠中可靠地測量I型膠原蛋白的稀釋系列，并檢測到含有少至5ng蛋白質(zhì)的條帶(左)。CHP可識別多種膠原類型(中)，由于其中性和親水性，對ECM(中)和細(xì)胞裂解液(右)中的非膠原分子沒有親和力。

用 Typhoon Imager 熒光成像記錄(λex: 488 nm). 圖片參考文獻(xiàn)^[1] .

此外，CHP可用于替代不成功的膠原抗體或常規(guī)膠原染色檢測高度變性組織中的膠原蛋白^[1]。 下圖顯示了完全加熱的豬韌帶切片中完整的膠原含量，通過F-CHP或B-CHP可見(進一步通過酶標(biāo)NeutrAvidin檢測)。CHP染色對膠原蛋白的特異性比傳統(tǒng)的膠原蛋白染色(如Sirus Red)更高，后者依賴于膠原蛋白結(jié)合的正電荷，可以對其他堿性氨基酸含量高的蛋白質(zhì)進行非特異性染色^[2]。

Reference

1.Direct detection of collagenous proteins by fluorescently labeled collagen mimetic peptides. Bioconjugate Chemistry(2013) 

2.Sirius red and acid fuchsin staining mechanisms. Biotechnic & Histochemistry (1998) 73, 71–77.

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