你想驗(yàn)證miRNA對(duì)靶基因的影響嗎?——雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定

你想了解miRNA和lncRNA/circRNA之間的靶向相互作用嗎?——雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定

你想知道下游基因的轉(zhuǎn)錄因子是什么嗎?——雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定  

是的，雙熒光素酶系統(tǒng)是如此強(qiáng)大! 

雙熒光素酶（Dual-Luciferase）報(bào)告基因系統(tǒng)是一種常用的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于研究基因表達(dá)和調(diào)控。雙熒光素酶報(bào)告基因通常以螢火蟲(chóng)熒光素酶（Luciferase）為報(bào)告基因，海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）為內(nèi)參基因。該報(bào)告系統(tǒng)具有檢測(cè)速度快、靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍寬、無(wú)細(xì)胞內(nèi)有源干擾等優(yōu)點(diǎn)。廣泛應(yīng)用于基因調(diào)控和非編碼RNA靶向相互作用的研究領(lǐng)域。今天，我們將重點(diǎn)討論這個(gè)話題。  

熒光素酶（Luciferase）來(lái)自于北美螢火蟲(chóng)，它能夠催化熒光素底物的氧化反應(yīng)，產(chǎn)生可見(jiàn)光。這種發(fā)光反應(yīng)非常靈敏和特異，使得熒光素酶成為研究基因表達(dá)和調(diào)控的理想工具。通過(guò)將熒光素酶基因與感興趣的基因啟動(dòng)子或調(diào)控序列連接，可以構(gòu)建熒光素酶報(bào)告基因，用于研究基因的轉(zhuǎn)錄活性和調(diào)控機(jī)制。

另一方面，海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）是一種海洋生物海腎中發(fā)現(xiàn)的發(fā)光酶，其發(fā)光機(jī)制與螢火蟲(chóng)熒光素酶不同。海腎熒光素酶熒光素酶（Renilla Luciferase）可以被共同底物，底物共軛的熒光素底物所催化，產(chǎn)生另一種發(fā)光。通過(guò)將海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）基因與內(nèi)部對(duì)照序列連接，可以構(gòu)建報(bào)告基因，用于對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的標(biāo)準(zhǔn)化和校正。  

雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)利用雙熒光素酶同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，可以實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)的定量和標(biāo)準(zhǔn)化。通過(guò)測(cè)量?jī)煞N發(fā)光信號(hào)的強(qiáng)度比例，可以減少實(shí)驗(yàn)誤差和干擾，提高結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。這種系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于基因調(diào)控研究、藥物篩選、信號(hào)通路分析等領(lǐng)域。 

EZMeta? 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、靈敏、快速的 檢測(cè)方法，產(chǎn)品基本信息如下。  

【產(chǎn)品基本信息】

貨號(hào)：D-AKC8010 

規(guī)格：100T / 1000T 

適用樣本：細(xì)胞、原生質(zhì)體、植物葉片 

儲(chǔ)存：-20℃保存12個(gè)月

【產(chǎn)品基本原理】

在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，螢火蟲(chóng)熒光素酶（Firefly luciferase）可以催化螢火蟲(chóng)熒光素（Luciferin）生成氧化熒光素（Oxyluciferin），在熒光素被氧化的過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。在氧氣存在的條件下，海腎熒光素酶（Renilla luciferase）可以催化腔腸素（Coelenterazine）氧化成腸酰胺（Coelenteramide），在腔腸素氧化的過(guò)程中也會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。通過(guò)熒光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。 

通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5'-啟動(dòng)子區(qū)克隆在 Luciferase 的上游，或把 3'-UTR 區(qū)克隆在 Luciferase 的下游，構(gòu)建成報(bào)告基因（Reporter gene）質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)熒光素酶活性的高低來(lái)判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎熒光素酶更多地被用作檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒先以螢火蟲(chóng)熒光素為底物檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶活性，然后加入抑制螢火蟲(chóng)熒光素酶催化的物質(zhì)，同時(shí)加入腔腸素檢測(cè)海腎熒光素酶活性，實(shí)現(xiàn)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。該試劑盒具有檢測(cè)迅速、靈敏度高、檢測(cè)范圍廣，無(wú)細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點(diǎn)。  

【產(chǎn)品注意事項(xiàng)】

1. 由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)，樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行檢測(cè)。

2. 為取得合適的測(cè)定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí)，每個(gè)樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制一致；使用具有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí)，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入。

3. 檢測(cè)時(shí)需使用全黑色或白色的 96 孔板，防止相鄰孔的干擾。

4. 螢火蟲(chóng)熒光素酶催化的生物發(fā)光的zui強(qiáng)波長(zhǎng)為 560 nm，海腎熒光素酶催化的生物發(fā)光的zui強(qiáng)波長(zhǎng)為 480 nm。

5. Renilla Luciferase Substrate 易揮發(fā)，注意密封保存。

【相關(guān)產(chǎn)品推薦】

總之，雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的起源于螢火蟲(chóng)和海腎中的發(fā)光酶，并且在基因表達(dá)和調(diào)控研究中發(fā)揮著重要作用。它提供了一種靈敏、可靠和高通量的方法，用于研究基因的轉(zhuǎn)錄活性和調(diào)控機(jī)制。   

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