Jackson ImmunoResearch推出的Alexa Fluor 555和568標(biāo)記二抗，通過創(chuàng)新的光譜設(shè)計與嚴(yán)格交叉吸附工藝，徹底革新了多靶點免疫熒光實驗的可行性。這兩款染料填補了傳統(tǒng)橙色通道（550-600 nm）的空白，與DAPI（核染色）、Alexa Fluor 488（綠色）、647（遠紅外）形成 “黃金四色組合” ，實現(xiàn)了細胞亞結(jié)構(gòu)的高分辨率同步成像。

在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中，熒光標(biāo)記技術(shù)一直是不可或缺的工具。無論是細胞成像、蛋白質(zhì)相互作用研究，還是流式細胞術(shù)，熒光染料的性能直接決定了實驗的成敗。今天，我們要為大家介紹兩款備受矚目的熒光染料——AF 555和AF 568，它們來自全球知名的抗體和熒光染料供應(yīng)商Jackson ImmunoResearch。

什么是AF 555和AF 568？

AF 555和AF 568是兩種高性能的熒光染料，屬于Alexa Fluor系列。它們以其卓越的光穩(wěn)定性、高量子產(chǎn)率和優(yōu)異的熒光強度而聞名。這些特性使得它們在多重?zé)晒鈽?biāo)記實驗中表現(xiàn)出色，尤其是在需要高分辨率和低背景噪聲的應(yīng)用中。

- AF 555：激發(fā)波長約為555 nm，發(fā)射波長約為565 nm，適合綠色到橙色的熒光通道。

- AF 568：激發(fā)波長約為568 nm，發(fā)射波長約為580 nm，適合橙色到紅色的熒光通道。

這兩種染料可以與抗體、蛋白質(zhì)、核酸等生物分子共價結(jié)合，廣泛應(yīng)用于免疫熒光、流式細胞術(shù)、超分辨率顯微鏡等領(lǐng)域。

為什么選擇AF 555和AF 568？

1. 卓越的光穩(wěn)定性  

在長時間成像實驗中，光漂白是一個常見問題。AF 555和AF 568具有優(yōu)異的光穩(wěn)定性，能夠在高強度激光照射下保持熒光信號，確保實驗結(jié)果的可靠性。

2. 高量子產(chǎn)率  

量子產(chǎn)率是衡量熒光染料效率的重要指標(biāo)。AF 555和AF 568的高量子產(chǎn)率意味著它們能夠?qū)⒏嗟募ぐl(fā)光轉(zhuǎn)化為熒光信號，從而提高檢測靈敏度。

3. 寬光譜范圍  

這兩種染料的激發(fā)和發(fā)射光譜范圍較寬，能夠與多種激光器和濾光片兼容，非常適合多重?zé)晒鈽?biāo)記實驗。

4. 低背景噪聲  

AF 555和AF 568的熒光信號與背景噪聲比（信噪比）極高，這使得它們在低表達目標(biāo)檢測中表現(xiàn)出色。

 應(yīng)用場景

1. 免疫熒光染色  

在免疫熒光實驗中，AF 555和AF 568可以與一抗或二抗結(jié)合，用于標(biāo)記細胞或組織中的特定抗原。它們的高亮度和光穩(wěn)定性使得成像結(jié)果更加清晰。

2. 流式細胞術(shù)  

在流式細胞術(shù)中，AF 555和AF 568可以用于標(biāo)記細胞表面或內(nèi)部的分子，幫助研究人員分析細胞群體的異質(zhì)性。

3. 超分辨率顯微鏡  

超分辨率顯微鏡技術(shù)（如STED、PALM/STORM）需要高亮度和光穩(wěn)定性的熒光染料。AF 555和AF 568是這些技術(shù)的理想選擇。

4. 多重標(biāo)記實驗  

由于AF 555和AF 568的光譜特性與其他Alexa Fluor染料（如AF 488、AF 647）兼容，它們可以用于多重標(biāo)記實驗，同時檢測多個目標(biāo)分子。

核心優(yōu)勢：

1. 光譜無干擾：AF555（Ex552/Em572）與AF568（Ex577/Em602）的激發(fā)/發(fā)射峰間距優(yōu)化至25-30 nm，顯著降低通道間串?dāng)_。

2. 交叉吸附工藝：所有二抗經(jīng)過驢/山羊宿主來源的嚴(yán)格吸附處理，消除與常見物種（如小鼠、兔、大鼠）抗體的非特異性結(jié)合。

3. 光穩(wěn)定性提升：對比傳統(tǒng)Cy染料（如Cy3/Cy5），Alexa Fluor系列光漂白抗性提高3-5倍，適合長時間活細胞成

Alexa Fluor染料的光譜特性：

實際應(yīng)用案例與性能驗證

人上皮細胞（HEp-2）四色成像

· 靶標(biāo)組合：DAPI（核）、AF488-Ki67（增殖）、AF555-α微管蛋白（細胞骨架）、AF647-GM130（高爾基體）。

· 結(jié)果：

o 分辨率提升40%：細胞器邊界清晰度顯著優(yōu)于傳統(tǒng)TRITC染料（圖2）。

o 信噪比提升25-30%：AF555/568的量子產(chǎn)率（Φ=0.69）高于同類染料，適合低豐度蛋白檢測。

可與DAPI結(jié)合用于四色免疫熒光的有用染料組合是Alexa Fluor 488、568和647。圖中展示了這種顏色組合在人類上皮細胞（HEp-2）中的應(yīng)用，這些細胞被染色以顯示常見的細胞蛋白標(biāo)記物。Ki-67蛋白（細胞增殖的標(biāo)志物）以綠色顯示。細胞骨架結(jié)構(gòu)的某些部分以黃色顯示，這是通過使用抗α-微管蛋白抗體染色微管來檢測異二聚體纖維的結(jié)果。細胞間接觸通過染色上皮細胞標(biāo)志物E-鈣黏蛋白來可視化，它以紅色顯示，與黃色的微管并列。細胞核用DAPI染色，以藍色顯示。

三種Alexa Fluor染料的光譜特性與DAPI核染色結(jié)合，實現(xiàn)有效的四色免疫熒光。通過染色人類上皮（HEp-2）細胞中的常見細胞蛋白標(biāo)記物，展示了這種顏色組合。Ki-67蛋白是細胞增殖的標(biāo)記物，在綠色中可見。細胞骨架結(jié)構(gòu)的某些方面在黃色中可見，通過使用抗α微管蛋白染色微管來檢測異二聚體纖維。參與高爾基體堆疊和結(jié)構(gòu)維持的高爾基體基質(zhì)蛋白，使用抗人GM130/GOLGA2染色，在細胞核邊緣呈紅色可見。細胞核使用DAPI染色，呈藍色。

產(chǎn)品選擇

1. 核心產(chǎn)品列表（部分）

注：完整列表涵蓋20+種宿主與抗體類型，支持IgG/IgM/IgA等亞型。

與傳統(tǒng)技術(shù)的對比優(yōu)勢

溫馨小貼士Tips：

1. 優(yōu)化抗體標(biāo)記比例  

為了獲得最佳的熒光信號，建議優(yōu)化抗體與染料的標(biāo)記比例。通常，每個抗體分子標(biāo)記3-6個染料分子效果最佳。

2. 選擇合適的濾光片  

確保顯微鏡或流式細胞儀的濾光片與AF 555和AF 568的激發(fā)和發(fā)射光譜匹配，以獲得最強的熒光信號。

3. 避免長時間光照  

盡管AF 555和AF 568具有優(yōu)異的光穩(wěn)定性，但仍建議盡量減少樣品在強光下的暴露時間，以延長熒光信號的壽命。

Jackson ImmunoResearch是全球領(lǐng)先的抗體和熒光染料供應(yīng)商，專注于為生命科學(xué)研究提供高質(zhì)量的產(chǎn)品和技術(shù)支持。其產(chǎn)品線涵蓋二抗、熒光染料、標(biāo)記試劑盒等，廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域。